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技術(shù)文章

穩(wěn)定細(xì)胞株篩選

閱讀:475          發(fā)布時(shí)間:2022-1-27

方法一:先把質(zhì)粒整合到染色體上后,用相應(yīng)的質(zhì)粒DNA中的抗性標(biāo)志來篩選該細(xì)胞系,單克隆篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。

第一步:篩選濃度測(cè)定,以10~14 天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度;

第二步:進(jìn)行細(xì)胞接種,轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞,各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)到60%~80% 覆蓋;

第三步:進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染

第四步:利用質(zhì)粒上含有的抗性選擇進(jìn)行篩選,并鑒定篩選結(jié)果。


方法二:應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒,慢病毒轉(zhuǎn)染,篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。慢病毒可以攜帶外源基因隨機(jī)整合進(jìn)基因組。轉(zhuǎn)染得到穩(wěn)定細(xì)胞株的效率高,是建立穩(wěn)定株的*方式。

第一步:將人源化的抗體基因轉(zhuǎn)接到慢病毒載體上,

第二步:使用包裝細(xì)胞,一般為293細(xì)胞,包裝出病毒,不同類型病毒包裝時(shí)間一般在3-5天。

第三步:用病毒轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞。包裝好的病毒要先測(cè)滴度,根據(jù)滴度決定轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞的病毒量。

第四步:后期篩選。轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞1-2天后加抗生素篩選得到穩(wěn)定細(xì)胞株。


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