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詳細(xì)介紹
人角膜成纖維原代細(xì)胞
人角膜成纖維細(xì)胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的角膜成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。角膜成纖維細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持角膜的正常形態(tài)，合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織。
英文名稱 | Human Corneal Fibroblast Cells | 組織來源 | 眼角膜組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7415 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人角膜成纖維細(xì)胞
組織來源：眼角膜組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人角膜成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人角膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
CHO-K1倉鼠卵巢細(xì)胞亞株 CHO-K1 Chinese hamster ovary cell subline F-12K+10%FBS | LF/LTF(Mouse Lactoferrin) ELISA KIT 小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白 96T |
RRAGA： RAS相關(guān)GTP結(jié)合蛋白A抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh RAB7 RAS癌基因相關(guān)蛋白RAB7抗體 規(guī)格 0.1ml |
Anti- Alpha-HCG/FITC 熒光素標(biāo)記α亞基人絨毛膜抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Calcineurin B： 鈣調(diào)0酸酶B亞基B1抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh Brucella 布氏桿菌菌體蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-C-SKI/FITC 熒光素標(biāo)記抗C-SKI抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
表皮生長因子受體-8抗體 Anti-EGFR-ⅤⅢ 0.2ml | phospho-alpha Adducin(Ser436)： 0酸化內(nèi)收蛋白a1抗體 0.1ml |
胰島素樣生長因子 | 人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞;HuT 78 |
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類);Pan02-CAG-tTA-3E6 木瓜蛋白酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL | WM35, 人黑色素瘤細(xì)胞 Human |
人胰島β細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | CCL2 Protein Mouse 重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
大鼠子宮平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | CL-0048Ca Ski(人上皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
RD細(xì)胞，人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞 屎腸球菌 艾氏腹水瘤瘤株;Ehrlich | 人角膜成纖維原代細(xì)胞Calcineurin B： 鈣調(diào)0酸酶B亞基B1抗體 0.1ml |
大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞;RIN-m5F | NCI-N87細(xì)胞，人胃腺癌細(xì)胞 人跟骨髓瘤細(xì)胞,Hp2/o細(xì)胞 草魚腎細(xì)胞;GIK |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(彝族);HYL 人腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-1 |
大鼠腦膜細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | Rabbit Anti-IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GTSE1/G2 and S phase expressed 1 G2期/S期應(yīng)答相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml | 人氣管上皮細(xì)胞cDNAHTEpiC cDNA |
EV71 polyprotein 3D： 腸道病毒71型/手足口病病毒抗體 0.2ml | Anti-LFABP/FABP-2 肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
(Mouse ovarian cancer marker-CA125) ELISA Kit 小鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 胰島素樣生長因子 |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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