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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人滑膜成纖維采用混合酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人滑膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人滑膜成纖維原代細(xì)胞 | 組織來源 | 滑膜組織 |
英文名稱 | Human Synovial Fibroblast Cells | 貨號(hào) | YS-01X7698 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人滑膜成纖維細(xì)胞分離自滑膜組織；滑膜組織是位于關(guān)節(jié)腔內(nèi)面的內(nèi)襯結(jié)構(gòu)，各種關(guān)節(jié)內(nèi)疾病均會(huì)累及滑膜。而滑膜細(xì)胞是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu)，同時(shí)在各種關(guān)節(jié)疾患中也是主要病變部位。骨關(guān)節(jié)炎（OA）以關(guān)節(jié)軟骨退行性變?yōu)樘卣鳎洳±砀淖兝奂瓣P(guān)節(jié)的各個(gè)組成部分，但絕不僅局限于軟骨，還包括軟骨下骨、滑膜、半月板和韌帶。各組成部分的病理改變相互影響，相互作用，共同加速關(guān)節(jié)的退變?；ぜ?xì)胞是構(gòu)成滑膜層的大細(xì)胞群體，是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu)，它包埋在顆粒狀無定性的基質(zhì)中，基質(zhì)內(nèi)有分散的纖維分布。滑膜由A型（巨噬樣滑膜細(xì)胞）、B型（成纖維樣滑膜細(xì)胞）以及C型（樹突細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞）細(xì)胞組成。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次；
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
原代平滑肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/250/100ml | NMDAR2A： 谷酸受體2A抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh MeCP2 甲基化CpG結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-TRAF3/CD40bp /FITC 熒光素標(biāo)記CD40結(jié)合蛋白/CD40受體相關(guān)因子1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
TNF-alpha 壞死因子-α抗原 0.5mg | Anti-NuMA 核有絲分裂器NuMA蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-FPRL1 /FITC 熒光素標(biāo)記脂氧素受體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh Slit2/Slil3 遷移蛋白Slit2/3抗體 規(guī)格 0.1ml |
anti-PDI/FITC 熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-AQP7/FITC 熒光素標(biāo)記水通道蛋白-7抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
PDGFRB Others Human 人 PDGFRB / CD140b 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | PVRL3 Others Human 人 PVRL3 / CD113 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人內(nèi)根殼細(xì)胞裂解物HHIRSCL | CHODL Others Rat 大鼠 CHODL / CHOndrolectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
IFNGR1 Others Human 人 IFNγR1 / CD119 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | IFNA13 Others Mouse 小鼠 IFNA13 / Ierferon alpha-13 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
ERAP2 Others Human 人 LRAP / ERAP2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CSAG1 Others Human 人 CSAGE / CSAG1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
豹貓肌肉成纖維樣細(xì)胞;LCM4 | 人滑膜成纖維原代細(xì)胞Anti-NuMA 核有絲分裂器NuMA蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
TSPAN8 Others Human 人 TSPAN8 / Teaspanin 8 / TM4SF3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CSC, 小鼠心肌細(xì)胞 |
尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基UCM | 人人(HEK-a) ( 5×105 ) 小鼠成纖維細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) Mouse |
豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL2 中國(guó)倉鼠肺細(xì)胞，V79-4細(xì)胞 3T6-Swiss albino細(xì)胞，小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 | GST tag： GST標(biāo)簽蛋白抗體 0.1ml |
Human alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISA Kit 人血漿α顆粒膜蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | PGLYRP1 Others Mouse 小鼠 PGLYRP / TNFSF3L 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
轉(zhuǎn)移抑制基因抗體 Anti-Kiss-1 0.1ml | sLR ELISA Kit 大鼠可溶性瘦素受體 96T |
AIP1： 激活素受體相互作用蛋白1抗體 0.2ml | PDGFRB Others Human 人 PDGFRB / CD140b 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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