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詳細介紹
人肺成纖維原代細胞
人肺成纖維細胞分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持肺器官的正常形態(tài)，合成和釋放細胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時大量聚集修復(fù)損傷組織。
英文名稱 | Human Lung Fibroblast Cells | 組織來源 | 肺組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7050 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人肺成纖維細胞
組織來源：肺組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實驗室分離的人肺成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人肺成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
雜交瘤(B類);IB3C10H12A12G2H8F3 | Anti-TrK A 酪激酶A抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
CHAc(Human choline acetylase) ELISA Kit 人乙?；?span> 96T | Anti-MITF/FITC 熒光素標(biāo)記小眼相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TLR7 Toll樣受體7抗體 規(guī)格 0.1ml | SOD(Human Super Oxidase Dimutase) ELISA Kit 人超氧化物歧化酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
Acetyl-Histone H4(K8)： 乙酰化組蛋白H4抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh CCDC136/NAG6 鼻咽癌相關(guān)蛋白6抗體 規(guī)格 0.2ml |
FAM71D： FAM71D蛋白抗體 0.2ml | EPO ELISA Kit 大鼠紅細胞生成素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞 (HREC)( 5×105 ) | SHZ-88(大鼠癌細胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠 EphA3 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人胚肺成纖維細胞;IMR-90 | FCER2 Others Mouse 小鼠 FCER2A / CD23 人細胞裂解液 (陽性對照) |
HPrSMC-c 人類前列腺平滑肌細胞(HPrSMC) 500,000cells 原代膠質(zhì)細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/250/100ml | TNFSF11 Others Cynomolgus 食蟹猴 RANKL / OPGL / TNFSF11 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人成纖維細胞;HFF Hepa 1-6, 小鼠肝癌細胞 Mouse | THY1 Others Mouse 小鼠 THY1 / CD90 人細胞裂解液 (陽性對照) |
腸靜脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 人肺成纖維原代細胞SOD(Human Super Oxidase Dimutase) ELISA Kit 人超氧化物歧化酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
CST3 Others Mouse 小鼠 CST3 / Cystatin-C / Cystatin-3 人細胞裂解液 (陽性對照) | 大鼠腸動脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基 100mL |
干擾素 | U-373MG-EGFP-puro[U-373MG-pLVT7](慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人腦膠質(zhì)瘤細胞 U-373MG-EGFP-puro[U-373MG-pLVT7] (leiviral consuct stable sain) of human brain glioma cells 1640+10%Hyclone 滅活血清+2μg/ml puromycin |
CCNE1 Others Human 人 CCNE1 / Cyclin-E1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-pre-X protein(NT)/FITC 熒光素標(biāo)記抗乙肝病毒pre-X蛋白抗體(N端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
OTX2： 轉(zhuǎn)錄因子OTX2抗體 0.2ml | SPC-A-1(人肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 FSTL1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
SPTLC1： 絲酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1抗體 0.2ml | C1orf103： 1號染色體開放閱讀框103抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG/AP 堿性0酸酶(AP)標(biāo)記的驢抗兔IgG 規(guī)格 0.1ml | 人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞 (HREC)( 5×105 ) |
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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