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詳細介紹
人表皮成纖維原代細胞
人表皮成纖維細胞分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結構，由復層扁平上皮構成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質層。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
英文名稱 | 見說明 | 組織來源 | 皮膚組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7554 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人表皮成纖維細胞
組織來源：皮膚組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實驗室分離的人表皮成纖維采用先蛋白酶消化、后-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的人表皮成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
MN-h, 小鼠海馬元 人肝上皮細胞，THLE-3細胞 EL4(淋巴瘤細胞) | OLAb ELISA Kit 大鼠氧化低密度脂蛋白抗體 96T |
Rab3A+Rab3B+Rab3C+Rab3D： ras癌基因家族Rab3A--Rab3D抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh AP 堿性0酸酶(AP)標記的兔抗親和素 規(guī)格 0.1ml |
Anti-HA tag/FITC 熒光素標記HA tag標簽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C16orf7： 16號染色體開放閱讀框7抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BTBD17 BTB/POZ結構域蛋白17抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-CRHR2/CRFR2/FITC 熒光素標記促腎上腺皮質釋放激素受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
轉錄因子E2F-1抗體 Anti-E2F1 0.1ml | ALF： 通用轉錄因子IIA樣因子抗體 0.1ml |
人結直腸腺癌細胞;HT-29 | CL-0335EB (NBL-4) (牛胚氣管細胞)5×106cells/瓶×2 |
45.6.TG1.7細胞，骨髓瘤細胞 人T細胞白血病細胞,HuT 78細胞 EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0901 | 293(人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2 |
大鼠胰腺星狀細胞培養(yǎng)基 100mL | NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, Fc 標簽) |
原代骨骼肌細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml | CL-0028AtT-20(小鼠垂體瘤細胞)5×106cells/瓶×2 |
MA104非洲綠猴胚胎腎上皮細胞 MA104 Africa green monkey embryonic kidney epithelial cells DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS | 人表皮成纖維原代細胞C16orf7： 16號染色體開放閱讀框7抗體 0.2ml |
大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1 | 小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-1 小鼠小腸血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基 100mL |
MuM-2C(人眼脈絡黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 氣管上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | MS751(人子宮頸表皮癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
胃癌組織源性原代成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml | IgG/RBITC 羅丹明標記的兔抗長爪沙鼠IgG 0.3ml |
Rhesus antibody Rh H1N1 Hemagglutinin 1/Influenza A bp1 甲型流感病毒血凝素抗體 規(guī)格 0.2ml | 人臍靜脈內(nèi)皮細胞;HUV-EC-C |
EXOSC3： 核糖體RNA合成蛋白40抗體 0.2ml | Anti-LIR-8/CD85c/LILRB5 白細胞免疫球蛋白樣受體8抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
IL-8/CXCL8(Mouse interleukin 8) ELISA Kit 小鼠白介素8Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 人結直腸腺癌細胞;HT-29 |
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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