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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的雞骨骼肌采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的雞骨骼肌經(jīng)α-Sarcometric actin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 雞骨骼肌原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 骨骼肌組織 |
英文名稱 | Chicken Skeletal Muscle Cells | 貨號(hào) | YS-01X7049 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
雞骨骼肌細(xì)胞分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱橫紋肌，肌肉中的一種，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長(zhǎng)柱形的多核細(xì)胞，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官，有豐富的血管、淋巴分布，在軀體支配下收縮或舒張，進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng)。肌肉可根據(jù)共形狀、大小、位置、起止點(diǎn)、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長(zhǎng)軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶）。明帶染色較淺，而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線。H線的中部有一M線。明帶中間，有一條較暗的線稱為Z線。兩個(gè)Z線之間的區(qū)段，叫做一個(gè)肌節(jié)。骨骼肌細(xì)胞也稱橫紋肌細(xì)胞，細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方，細(xì)胞多呈梭行，具有一定的方向性。骨骼肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
HCC-9204細(xì)胞，肝癌細(xì)胞 人細(xì)胞,HeLa細(xì)胞 人角膜上皮細(xì)胞cDNAHCEpiC cDNA | beta-Amyloid 1-42 (CT)： β淀粉樣肽1-42(C端)/β-Amyloid 1-42 (CT)抗體 0.1ml |
Anti-phospho-HDAC7 (Ser318) 0酸化組蛋白去乙酰化酶7抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | Rhesus antibody Rh ACADS ?；摎涿付替溈贵w 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Caspase-3/RBITC 紅色熒光素羅丹明標(biāo)記(RBITC)Caspase-3 蛋白抗體(標(biāo)記抗體)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh IFN-β 干擾素β抗體 規(guī)格 0.1ml |
NGF-R(p75NTR) 生長(zhǎng)因子受體(抗原) 0.5mg | HIV2 gp36： 人類免疫缺陷病毒2型/2型艾滋病病毒gp36抗體 0.1ml |
IgM/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM50B FAM50B蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1 | CM-H018人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
HT-29細(xì)胞，人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 人黑色素瘤細(xì)胞,HME7細(xì)胞 SV40T轉(zhuǎn)化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;PUMC-HUVEC-T1 | H4-IIE(大鼠肝癌細(xì)胞 ) 5×106cells/瓶×2 |
CL-0181P3X63Ag8(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | Acc-2(人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
成骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | IL22 Protein Human 重組人 IL22 / IL-22 / Ierleukin 22 蛋白 |
HR-8348細(xì)胞，直腸腺癌 人淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞,JK(Jurkat)細(xì)胞 人小細(xì)胞肺癌;NCI-H2227 | 雞骨骼肌原代細(xì)胞Rhesus antibody Rh IFN-β 干擾素β抗體 規(guī)格 0.1ml |
HGF Protein Rat 重組大鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白 | CSF2 Others Mouse 小鼠 GM-CSF / CSF2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
35.1雜交瘤細(xì)胞抗CD2 35.1 hybridoma cells against CD2 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS | 蛋白酶-EDTA(含100mL酶解緩沖液) 10mL |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;Mao | Rhesus antibody Rh IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗水貂IgG 規(guī)格 0.1ml |
NOS ELISA Kit 大鼠合成酶 96T | FO 小鼠骨髓瘤細(xì)胞 |
rDen-2(rh-Dengue Virus) 重組人登革熱病毒2型診斷抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 100ug | aGT(Human angiotensinogen) ELISA Kit 人血管緊張素原Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MDMX： MDM2樣P53蛋白結(jié)合抗體 0.1ml | 非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1 |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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