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詳細(xì)介紹
雞肺成纖維原代細(xì)胞
雞肺成纖維細(xì)胞分離自肺組織；肺是機(jī)體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱(chēng)喉為肺之門(mén)戶，鼻為肺之外竅。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)；成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺成纖維細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持肺器官的正常形態(tài)，合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織。
英文名稱(chēng) | Chicken Lung Fibroblast Cells | 組織來(lái)源 | 肺 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8277 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱(chēng)：雞肺成纖維細(xì)胞
組織來(lái)源：肺
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
雞肺成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的雞肺成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的雞肺成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
小鼠骨髓瘤細(xì)胞;Fox-NY 小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | Rhesus antibody Rh GIRK1 G蛋白激活內(nèi)向通道1抗體 規(guī)格 0.1ml |
AFP-L2(Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 2) ELISA Kit 人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗親和素 0.1ml |
intestinal FABP： 小腸型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 0.1ml | APF(Human anti-perinuclear factor) ELISA Kit 人抗核周因子抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RMND1 減數(shù)分裂同源蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Ku-80/FITC 熒光素標(biāo)記DNA修復(fù)酶Ku-80抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-Torc1/Crtc1 (Ser151) 0酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體 規(guī)格 0.1ml | LBP ELISA Kit 大鼠脂多糖結(jié)合蛋白 96T |
人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞 Human | NCI-H1975 人肺腺癌細(xì)胞 |
SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌耐藥細(xì)胞株 | DKK1 Protein Human 重組人 DKK1 / Dkk-1 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
CL-0179P19(小鼠畸胎瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | PC-12(未分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化) |
T-110A透明質(zhì)酸酶(含10mL酶解緩沖液)1mL | 間充質(zhì)干細(xì)胞脂肪細(xì)胞分化生長(zhǎng)添加物MADS |
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LS 174T [LS174T] 大鼠雪旺氏細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 雞肺成纖維原代細(xì)胞APF(Human anti-perinuclear factor) ELISA Kit 人抗核周因子抗體 96T |
散鱗鏡鯉尾鰭細(xì)胞;YZ21 | Promocell C-28014 Mesenchymal Stem CellChondrogenic Diff. Medium w/o, 間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨分化培養(yǎng)基無(wú)誘導(dǎo)劑(即用型) 100ml |
KIAA1279 Others Human 人 KIAA1279 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CM-H008人氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
人前列腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PC-3M-2B4 | Rhesus antibody Rh AQP0/MIP26 水通道蛋白0抗體 規(guī)格 0.1ml |
BXDC2： BXDC2蛋白抗體 0.2ml | 人腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Anti-TAK1/FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β活化激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Phospho-PLK1 (Thr210)： 0酸化絲/蘇酸蛋白激酶Plk1抗體 0.1ml |
Anti-nectin 2/CD112/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞黏附分子CD112抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞 Human |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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