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詳細介紹
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性定量方法，已得到，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
操作流程
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質粒抽提——>質粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質粒實物保存。
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 規(guī)格 |
艱難梭菌(TCD-A)核酸檢測試劑盒 | PCR檢測試劑盒 | 50T |
下列相關產(chǎn)品：
小鼠尾加壓素2受體(S2R)PCR檢測試劑盒 ，英文名： S2R
兔8-異構前列腺素(8-epi-PGF2α)ELISA檢測試劑盒Rabbit8-epi-prostaglandinF2alpha,8-epi-PGF2αELISAKit 50T
牛唾液酸(SA)免疫試劑盒 Bovine Sialic Acid,SA
英文名稱HumanargininevasopressinELISAKIT人精加壓素
調料D-葡萄糖酸內(nèi)脂比色法定量檢測試劑盒20次
RatphosphoProteinKinaseC,P-PK
PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法 產(chǎn)品僅用于科研實驗
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
大鼠N-甲基-D-天氡酸離子能谷酸受體1(GRIN1)ELISA試劑盒 ，英文名： GRIN1 ELISA Kit
Malondialdehyde (MDA) ELISA Kit 人二(MDA)ELISA試劑盒
ChickensecretoryimmunoglobulinA,SIgAELISAKit 雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforcANCA(humanai-neuophilcytoplasmicaibody)ELISAKit人抗中性粒細胞胞漿抗體規(guī)格：48T/96T
細菌β-半乳糖苷酶活性超敏熒光定量檢測試劑盒20次
Ratadiponectin,ADPELISAKit大鼠脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠酪酸羥化酶(TH)ELISA試劑盒 ，英文名： TH ELISA Kit
大鼠血管生長素(ANG)ELISA檢測試劑盒RatAngiogenin,ANGELISAKit 96T/48T
人低密度脂蛋白受體相關蛋白4(LRP-4)免疫試劑盒 Human LRP-4 ELISA Kit
RatN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit大鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
FGP處理DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒20次
Mouseserine/threonineproteinkinase,STKELISA試劑盒小鼠絲/蛋酸酶(STK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
艱難梭菌(TCD-A)核酸檢測試劑盒Anti-Syntaxin 1/Syn1A /FITC 熒光素標記突觸融合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
ICAD(Inhibitor of Caspase-Activated DNase ) Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶抑制劑(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Rad51抗體 Anti-Rad51 0.2ml
phospho-STAT1 (Ser727) 英文名稱： 0酸化信號轉導與轉錄激活因子1抗體 0.1ml
ENPP2 英文名稱： 核苷酸焦0酸酶2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-MK5(Ser311+Thr315) 0酸化原活化蛋白5抗體 規(guī)格 0.1ml
ICAD(Inhibitor of Caspase-Activated DNase ) Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶抑制劑(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
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