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大鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

Saos-2，人成骨肉瘤細(xì)胞

Caco-2，人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

NCI-N87 [N87]人胃癌細(xì)胞

MGC80-3（MGC-803）人胃癌細(xì)胞

EC109，人食管癌細(xì)胞

HGC-27人胃癌細(xì)胞

AGS人胃腺癌細(xì)胞

U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞

THP-1人單核白血病細(xì)胞

HuH-7人肝癌細(xì)胞

RBE, 人肝膽管癌細(xì)胞

MiaPaCa-2, 人胰腺癌細(xì)胞

KM3, 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞

QGY-7701, 人肝癌細(xì)胞

PANC-1, 人胰腺癌細(xì)胞

U266B1 [U266], 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞

Hep G2, 人肝癌細(xì)胞系

PC-12(高分化)，PC12，大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤分化細(xì)胞株(高分化)

GH3, 大鼠垂體生長激素腺瘤

Hepa 1-6, 小鼠肝癌細(xì)胞

QBC-939, 人膽管癌細(xì)胞

B16-F10, 小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移細(xì)胞

SGC-7901, 人胃腺癌細(xì)胞系

SK-N-SH, 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細(xì)胞

A549, 人肺癌細(xì)胞系

SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株

A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細(xì)胞株

A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細(xì)胞株