各位老師們培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)想必頭疼的就是各種污染問(wèn)題,尤其是一些珍貴細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)污染后更是欲哭無(wú)淚,有時(shí)候出現(xiàn)污染但是沒(méi)有留心則會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)度,所以小愛(ài)為大家掙了一下細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)的問(wèn)題和處理方法,爭(zhēng)取讓老師們少走些彎路。
一、黑膠蟲(chóng)污染
因?yàn)樾?ài)近期收到客戶反饋實(shí)驗(yàn)細(xì)胞被黑膠蟲(chóng)污染導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行,所以這邊首先解一下黑膠蟲(chóng)污染,黑膠蟲(chóng)屬于一種爭(zhēng)議生物,有人認(rèn)為是從血清中來(lái)的一種原蟲(chóng),也有人認(rèn)為是細(xì)菌,或是真菌,也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶。"黑膠蟲(chóng)"可寄生于動(dòng)物細(xì)胞,也可以生存于中,依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)為生,并隨細(xì)胞傳代而傳代。"黑膠蟲(chóng)"與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng),開(kāi)始時(shí)對(duì)細(xì)胞并沒(méi)有什么影響,但當(dāng)黑膠蟲(chóng)的數(shù)量多到一定程度的時(shí)候, 細(xì)胞生長(zhǎng)就會(huì)受到影響直至死亡,嚴(yán)重影響了科研活動(dòng)的開(kāi)展和進(jìn)行。老師們?nèi)绻龅脚囵B(yǎng)基中被黑膠蟲(chóng)污染可以選擇專門(mén)的除黑膠蟲(chóng)培養(yǎng)基來(lái)改善。
二、細(xì)菌污染
細(xì)菌污染是常見(jiàn)的細(xì)胞污染,一旦實(shí)驗(yàn)環(huán)境殺菌處理不當(dāng),很大概率會(huì)引起細(xì)胞污染,根據(jù)污染的細(xì)菌形態(tài)不同,細(xì)菌污染后顯微鏡下觀察結(jié)果也不同,其次,培養(yǎng)液發(fā)黃,變渾濁,可明顯看見(jiàn)培養(yǎng)皿中有細(xì)沙狀的沉淀物,時(shí)不時(shí)還有異樣氣味發(fā)出,如下圖所示,可以在培養(yǎng)基中加入抗生素處理,可以用四環(huán)素,慶大霉素,或者鏈霉素,前兩者的工作濃度是50 μg/mL;鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL。但是,細(xì)胞自身可能會(huì)收到影響,因此預(yù)防污染是首要。
(圖片轉(zhuǎn)自生物女學(xué)霸)
三、真菌污染
真菌污染的培養(yǎng)基在早期不易觀察,到中期出現(xiàn)絲狀或絮狀物時(shí)培養(yǎng)基已經(jīng)污染嚴(yán)重,細(xì)胞基本已經(jīng)死亡,發(fā)現(xiàn)后應(yīng)立即將培養(yǎng)基處理掉,操作臺(tái)紫外殺菌消毒,培養(yǎng)皿以及相關(guān)耗材放入高壓蒸汽鍋中滅菌處理。(霉菌同真菌一樣)
四、支原體感染
培養(yǎng)液變渾濁,支原體感染細(xì)胞以后,細(xì)胞病變不很明顯,只是細(xì)胞狀態(tài)變差、生長(zhǎng)變慢,在顯微鏡下觀察可能會(huì)有小黑點(diǎn),但培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁。細(xì)胞傳代以后就出現(xiàn)細(xì)胞間黑點(diǎn),細(xì)胞空泡化,很多類似凋亡、壞死的細(xì)胞,終細(xì)胞漂浮,*死亡。此時(shí)切斷源頭為關(guān)鍵,實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行全面滅菌處理,并換用支原體清除培養(yǎng)基進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
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