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淋巴細胞的分離方法有哪些?

閱讀:5340      發(fā)布時間:2020-3-10
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  淋巴細胞分離液是一種用于分離人外周血淋巴細胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據(jù)血細胞的密度差異,通過離心使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將淋巴細胞從人外周血或臍帶血中分離出來。分離純度:使用人淋巴細胞分離液分離淋巴細胞的分離純度大于90%。
  淋巴細胞分離方法有哪些?主要包括粘附貼壁法,吸附柱過濾法,磁鐵吸引法。
  一、粘附貼壁法:
  將已制取的單獨核細胞懸浮液傾于玻璃或塑膠培養(yǎng)皿或偏平小瓶中,挪到37℃溫箱浸泡1小時上下,淋巴細胞和粒細胞均貼于平皿內(nèi)壁,而未貼壁的非粘附細胞基本上為純淋巴細胞,繼用橡皮刮去貼壁的細胞即是純單核細胞群。因細胞也是貼壁現(xiàn)象,用這樣的方法可以分開的淋巴細胞群中細胞進而損害。
  二、吸附柱過濾法:
  將單獨核細胞懸浮液引入配有玻纖或葡聚糖疑膠的柱層中,凡有粘附潛質(zhì)的細胞絕大多數(shù)被吸咐而黏滯在柱層中,從柱上洗脫下來的細胞關(guān)鍵是淋巴細胞。此法行之有效,對細胞很少損傷。
  三、磁鐵吸引法:
  運用單核細胞具備吞噬的特點,在單獨核細胞懸浮液中加直徑為3µm的顆粒,置37℃溫箱里暫時性轉(zhuǎn)動搖晃,待單核細胞充足吞食顆粒后,用磁石將細胞吸至管頂,頂層液中含較純的淋巴細胞。

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