在解凍胎牛血清之前，需要做好準(zhǔn)備工作。首先，應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)室環(huán)境清潔，避免污染，可以使用紫外線照射無菌工作臺(tái)和實(shí)驗(yàn)空間，同時(shí)配合使用實(shí)驗(yàn)室微生物污染祛除類試劑，比如德國Minerva Biolabs生產(chǎn)的Mycoplasma Off支原體祛除噴霧劑，對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔，降低胎牛血清在解凍、分裝或使用過程中被污染的可能性。其次，準(zhǔn)備好所需的實(shí)驗(yàn)器材，如無菌移液管、無菌試管，并確保這些器材是嚴(yán)格無菌的。此外，還需檢查胎牛血清的包裝是否完好無損，如有破損或污染，則不應(yīng)使用。
胎牛血清這種混合物中，融化速度：蛋白質(zhì)等干物質(zhì)>水這類溶劑，所以蛋白質(zhì)會(huì)先溶解析出，而水還是結(jié)成冰的狀態(tài)，導(dǎo)致瓶子中間會(huì)出現(xiàn)一根透明的冰柱，而周圍則會(huì)呈現(xiàn)上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài)，在使用過程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過高等問題，影響細(xì)胞生長。
更重要的一點(diǎn)是，血清中珍貴的生長因子等活性物質(zhì)，它們?cè)诮鈨鲞^程中，有著與細(xì)胞復(fù)蘇類似的經(jīng)歷，都需要快速解凍才能很大程度地保留生物活性。顯然，4℃過夜這樣的長時(shí)間處理，很有可能會(huì)導(dǎo)致一部分「營養(yǎng)成分」的損失，影響細(xì)胞生長。因此，正確的解凍方法，應(yīng)該是盡可能讓胎牛血清所有成分同時(shí)融化。
我們推薦使用更科學(xué)“三步法"對(duì)胎牛血清進(jìn)行解凍。根據(jù)待解凍的胎牛血清的量不同，按照下表中的建議時(shí)長與溫度對(duì)其進(jìn)行處理。需要注意的是，如果血清是儲(chǔ)存在-80℃冰箱中，正式解凍前應(yīng)先轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中過渡。
操作 | 溫度 | 100ml | 500ml | 1000ml |
步驟一 | 室溫 | 35 min | 90 min | 100 min |
或15-20℃水浴 | 5 min | 18 min | 20 min | |
步驟二 | 20℃水浴 | 15 min | 25 min | 30 min |
步驟三 | 37℃水浴 | 20 min | 35 min | 45 min |
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