人腎損傷分子 1（Kim-1）檢測(cè)試劑盒（ELISA）說(shuō)明書(shū)本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人腎損傷分子1（Kim-1）水平。用純化的人腎損傷分子1（Kim-1） 捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入人腎損傷分子1（Kim-1），再與HRP標(biāo)記 的檢測(cè)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化 下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人腎損傷分子1（Kim-1）呈正 相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人腎損傷分子1（Kim-1） 含量。

產(chǎn)品組成：

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試劑盒性能： 1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.95 以上。 

2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于 10%和 15% 。 

檢測(cè)范圍： 0.25 ng/mL - 8 ng/mL 

靈敏度： 檢測(cè)濃度小于 0.1 ng/mL

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫 20-25℃。

使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干

燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)

試劑的生物活性。

9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。

試劑準(zhǔn)備：

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。2021 版

操作步驟：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)

包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。

加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 100μl，空白孔除外。

4. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。

5. 配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。

6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍

干。

7.

顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘.

8. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（

OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以

內(nèi)進(jìn)行。