如何選擇合適的蛋白交聯(lián)劑Protein crosslinker

交聯(lián)劑是一類(lèi)小分子化合物，具有2個(gè)或者更多的針對(duì)基團(tuán)（氨基、羧基、巰基等）的反應(yīng)性末端，可以和2個(gè)或者更多的分子分別偶聯(lián)，從而使這些分子結(jié)合在一起。在生命科學(xué)研究中，巧妙地運(yùn)用交聯(lián)劑可以使很多工作取得突破。

間相互作用研究 ：大多數(shù)-結(jié)合相互作用是瞬時(shí)的，通過(guò)交聯(lián)方法可以穩(wěn)定或連接相互作用復(fù)合物中的成分，從而有助于鑒別這些瞬時(shí)接觸。一旦相互作用的成分被共價(jià)偶聯(lián)，可以使用其他步驟（例如細(xì)胞裂解，親和純化和電泳）來(lái)制備分析樣品，同時(shí)可維持的相互作用復(fù)合物。  生物研究（靶向科研）：將能識(shí)別表面抗原的抗體與科研共價(jià)連接，實(shí)現(xiàn)靶向，減少傳統(tǒng)化療方法對(duì)健康細(xì)胞的殺傷。  載體蛋白與半抗原的連接：半抗原只有反應(yīng)原性而沒(méi)有原性。而將包被蛋白的一段序列可以和載體蛋白連接后制成疫苗，激發(fā)反應(yīng)。 另外也可以通過(guò)這種方法制備單克隆抗體，并利用此單抗返回找到大分子蛋白上的抗原結(jié)合位點(diǎn)。在連接二者的操作中，較低的半抗原-載體蛋白摩爾比會(huì)帶來(lái)更高的抗體親和力。此外將半抗原連接在載體蛋白中間的氨基酸上比連接在其末端時(shí)產(chǎn)生的的抗體效價(jià)更高。  或其他分子的固相化：將通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合在磁珠，96孔板，玻璃等等基質(zhì)上  抗體的標(biāo)記、標(biāo)記轉(zhuǎn)移：將抗體與酶，熒光基團(tuán)或者連接用于定量測(cè)量或者定位觀察?？贵w標(biāo)記與修飾之前，需要用固定化的抗原純化。為了避免抗體結(jié)合抗原的位點(diǎn)被封閉，選擇抗體重鏈上合適位置的的氨基酸比較重要。

此外，還可以將抗體酶切，獲得抗原結(jié)合片段，然后將標(biāo)記基團(tuán)與抗原結(jié)合片段連接。這種方法的特點(diǎn)是在ELISA反應(yīng)中減少了Fc片段的干擾，并且也增加了這一復(fù)合物的膜通透性，使之更適合標(biāo)記活體細(xì)胞。圖3是將標(biāo)記基團(tuán)結(jié)合在鉸鏈區(qū)二硫鍵打開(kāi)生成的巰基上。圖4是將標(biāo)記基團(tuán)直接結(jié)合在抗體結(jié)合片段上。

目前已經(jīng)研究使用的蛋白交聯(lián)劑有100多種，在選擇合適的蛋白交聯(lián)劑時(shí)需要考慮反應(yīng)的性與指向性，間臂長(zhǎng)度性，水溶性，透膜性，選擇何種反應(yīng)基團(tuán)，熱反應(yīng)還是光電反應(yīng)，可否切斷（用于抗體標(biāo)記轉(zhuǎn)移）等等因素。

西安齊岳生物供應(yīng)的蛋白交聯(lián)劑產(chǎn)品列表：

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（2020.06.01）