中藥材中黃曲霉毒素的測定（*執(zhí)行2015 版中國藥典黃曲
霉毒素測定法）
1、適用范圍
適合于陳皮、胖大海、僵蠶、酸棗仁、桃仁，柏子仁、蓮子、使君子、檳榔、麥芽、肉豆蔻、決明子、遠(yuǎn)志、薏苡仁、大棗、地龍、蜈蚣、水蛭、全蝎等中藥材品種。

1、提取步驟
取供試品粉末約15.0 g(過二號篩)，精密稱定，加入氯化鈉3.0 g，置于均質(zhì)瓶中，精密加入70%甲醇溶液75.0 mL，高速攪拌2 分鐘（攪拌速度大于11, 000 轉(zhuǎn)/分），離心5 分鐘(離心速度2500 轉(zhuǎn)/分)，定性濾紙過濾、然后精密量取上清液15.0 mL，置50 ml 量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，量取續(xù)濾液20.0 mL，待凈化。

混合對照品溶液的制備：精密量取黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)品（黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 標(biāo)示濃度分別為1.0 μg/ml、0.3 μg/ml、1.0 μg/ml、0.3 μg/ml）0.5 ml，置10 ml 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為儲備液。

2、免疫親和SPE 柱凈化步驟凈化
SPE 柱：黃曲霉毒素免疫親和柱（3 mL）
1）回溫解凍：提前半個小時將黃曲霉毒素免疫親和柱從冰箱拿出常溫解凍；
2）上樣：準(zhǔn)確移取20mL提取好的樣品溶液注入免疫親和柱，使溶液以1滴/S的速度通過免疫親和柱，直至2mL-3mL 空氣通過柱體，棄去流出液；
3）淋洗：用20mL水淋洗免疫親和柱，流速為1滴/s--2 滴/s，淋洗兩次。直至空氣進(jìn)入免疫親和柱，直至2mL-3mL空氣通過柱體，棄去全部的流出液，抽干小柱；
4）洗脫：準(zhǔn)確加入1.0 mL 甲醇洗脫，流速約為1滴/s，收集全部的洗脫液于干凈的離心管中，用甲醇-乙腈-水(40: 18: 42)定容至2mL，供液相色譜測定。
注：1）進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)時，當(dāng)樣品用提取液提取完成，并用定量濾紙過濾之后即進(jìn)行加標(biāo)，然后進(jìn)行免疫親和柱凈化等后續(xù)的處理。
2）黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋，必須要用用流動相甲醇-乙腈-水(40: 18: 42)進(jìn)行稀釋，否則峰型極為不理想，這是本實(shí)驗(yàn)過程中的一個非常重要的小細(xì)節(jié)。
3）進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)時，取50μL 儲備液，用流動相定容至2mL 即的。

3、色譜條件(光化學(xué)衍生方法)
色譜柱：C18,4.6×250mm, 5 μm，
流動相：甲醇-乙腈-水(40: 18: 42)
流速：0.8 mL/min
柱溫：30 oC
進(jìn)樣量：20 μL
檢測波長：Ex = 360 nm，Em = 450 nm

4.色譜圖或者加標(biāo)回收率結(jié)果

圖1：陳皮項(xiàng)目四種黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖（從左到右依次為G2，G1，B2，B1，濃度為0.75ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

                               圖2：陳皮樣品色譜圖

圖3：陳皮樣品加標(biāo)色譜圖（從左到右依次為G2，G1，B2，B1，加標(biāo)濃度為0.75ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

圖4：胖大海項(xiàng)目四種黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖（從左到右依次為G2，G1，B2，B1，濃度為0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

                           圖5：胖大海樣品色譜圖

圖6：胖大海樣品加標(biāo)色譜圖（從左到右依次為G2，G1，B2，B1，加標(biāo)濃度為0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

圖7：僵蠶項(xiàng)目四種黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖（從左到右依次為G2，G1，B2，B1，濃度為0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

                  圖8：僵蠶樣品色譜圖

圖9：僵蠶樣品加標(biāo)色譜圖（從左到右依次為G2，G1，B2，B1，加標(biāo)濃度為0.75ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

圖10：酸棗仁項(xiàng)目四種黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖（從左到右依次為G2，G1，B2，B1，濃度為0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

               圖11：酸棗仁樣品色譜圖

圖12：酸棗仁樣品加標(biāo)色譜圖（從左到右依次為G2，G1，B2，B1，加標(biāo)濃度為0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

圖13：桃仁項(xiàng)目四種黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖（從左到右依次為G2，G1，B2，B1，濃度為0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

                    圖14：桃仁樣品色譜圖

圖15：桃仁樣品加標(biāo)色譜圖（從左到右依次為G2，G1，B2，B1，加標(biāo)濃度為0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

光化學(xué)衍生器
光化學(xué)柱后衍生反應(yīng)器廣泛應(yīng)用于液相色譜檢測分析，使用時置于色譜柱和檢測器之間，進(jìn)行柱后連續(xù)光化學(xué)衍生反應(yīng)提高熒光、紫外、電化學(xué)檢測和化學(xué)發(fā)光檢測器的靈敏度和響應(yīng)的選擇性。
采取液相色譜-熒光法檢測黃曲霉毒素時，使用光化學(xué)衍生器進(jìn)行柱后衍生，不需要任何化學(xué)試劑，能
有效增強(qiáng)黃曲霉毒素B1 和G1 的熒光強(qiáng)度，黃曲霉毒素B1 和G1 靈敏度能夠達(dá)到0.5ppb以下。光化學(xué)柱后衍生光化學(xué)反應(yīng)裝置除應(yīng)用于黃曲霉毒素檢測外, 還可以應(yīng)用于大量的巴比妥酸鹽、氨基酸、多肽、黃曲霉毒素、維生素及磺胺類藥物等分析。

產(chǎn)品參數(shù)
貨號：00782-0043 ；
運(yùn)行環(huán)境溫度5℃～40℃；
相對濕度≤85%；
適用電壓220V(±10%)，50Hz(±2%)
zui大流速1-2ml/min；
符合AOAC 2005.08, AOAC 2008.02, AOCS Aa 11-05，中國臺灣標(biāo)準(zhǔn)（食字0981800370 號公告）和歐盟藥典2.8.18 標(biāo)準(zhǔn)分析方法，中國藥典（中國藥典增訂光化學(xué)衍生法）。