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ITRAQ服務
ITRAQ服務簡單介紹:
蛋白質(zhì)組分析(proteomics) 是對生物蛋白組(proteome) 的分析與檢測,蛋白組分析先要將混合蛋白質(zhì)分離, 分離的主要方法是蛋白雙向電泳。已被分離的蛋白質(zhì)由質(zhì)譜分析對其進行鑒定。
iTRAQ服務的4種同位素標記試劑由4種相對分子質(zhì)量分別為114、115、116和117的報告基團(reporter group),相對分子質(zhì)量分別為31、30、29 和28 的質(zhì)量平衡基團(balance group)以及一個相同的肽反應標記試劑基團(peptide reactive group)組成。不同的報告基團分別與相應的平衡基團相配后,相對分子質(zhì)量均為145,即等量異位標簽(isobaric tag)。
將蛋白質(zhì)裂解為肽段,然后用iTRAQ試劑進行差異標記。由于iTRAQ試劑是等量的,即不同同位素在標記同一多肽后在*級質(zhì)譜檢測,分子量相同,用串聯(lián)質(zhì)譜方法對在*級質(zhì)譜檢測到前體離子(precursor ion)進行碰撞誘導解離,產(chǎn)物離子通過第二級質(zhì)譜進行分析。在二級質(zhì)譜分析過程中,報告基團、質(zhì)量平衡基團和多肽反應基團之間的鍵斷裂,質(zhì)量平衡基團丟失,產(chǎn)生低質(zhì)荷比(m/z)的報告離子。由于二級質(zhì)譜可分析相對分子質(zhì)量相差1的報告基團,不同報告基團離子強度的差異就代表了它所標記的多肽的相對豐度。同時,多肽內(nèi)的酰胺鍵斷裂,形成一系列b 離子和y 離子,得到離子片段的質(zhì)量數(shù),通過數(shù)據(jù)庫查詢和比較,可以鑒定出相應的蛋白質(zhì)前體.
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