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?為了實現(xiàn)成功的細(xì)胞培養(yǎng)，須分析各類可用細(xì)胞的優(yōu)缺點，了解哪類細(xì)胞能提供最有益的產(chǎn)出。

• 貼壁細(xì)胞

貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)皿上單層生長。在傳代過程中，必須使用分離劑（如胰蛋白酶或細(xì)胞消化液）將這些細(xì)胞分離；而通常情況下，它們會在接種后2-4小時內(nèi)重新粘附到孔板上。

• 懸浮細(xì)胞（即淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞）

不會粘附在培養(yǎng)皿表面，而是懸浮在培養(yǎng)基中。它們通常成團(tuán)生長，尤其是在密度較高處。

• 原代細(xì)胞

從其原生組織中直接分離并體外培養(yǎng)。常用的原代細(xì)胞包括通過皮膚活檢直接從患者體內(nèi)分離出的成纖維細(xì)胞、從胚胎期或出生后的小鼠或大鼠的大腦特定區(qū)域離解出的神經(jīng)元，以及從患者血液樣本中分離出的紅細(xì)胞。

• 永生化細(xì)胞系

與原代細(xì)胞一樣來源于組織樣本，但已經(jīng)歷過永生化，細(xì)胞系可以多次傳代而不喪失活性，并繞開與原代細(xì)胞相關(guān)的倫理規(guī)范。細(xì)胞系通常易于培養(yǎng)，還可在液氮中冷凍以長期儲存，并在日后復(fù)蘇（解凍）以繼續(xù)使用。

• iPSC

誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（簡稱iPSC或iPS細(xì)胞）衍生自血液或皮膚，已被重新編程為多能性干細(xì)胞（或胚胎樣干細(xì)胞），這意味著它們可以分化成任何類型的人體細(xì)胞。在不同的發(fā)育階段添加特異性生長因子可以使細(xì)胞分化成所需的類型。

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細(xì)胞培養(yǎng)中的許多挑戰(zhàn)都源于不良的液體處理技術(shù)，而通過優(yōu)化移液器選擇，減少所需的處理步驟并規(guī)范移液操作，可以改善或避免這些挑戰(zhàn)。

以下幾個特點需特別注意：

01 無菌性

細(xì)胞培養(yǎng)中使用的液體處理設(shè)備和耗材可能會滋生許多微生物。遵循以下建議可降低液體處理設(shè)備與細(xì)胞之間交叉污染的概率：

• 細(xì)胞培養(yǎng)中使用的設(shè)備（包括單通道、多通道移液器和連續(xù)分配器）應(yīng)專用于其對應(yīng)區(qū)域

• 在細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)施中使用任何移液器之前，先用70%的酒精對其移液端進(jìn)行消毒，并盡可能使用無菌濾芯吸頭

• 計劃定期清潔儀器的內(nèi)部組件

• 定期對儀器進(jìn)行維修保養(yǎng)，以驗證其內(nèi)部組件的完整性（即確保無腐蝕、破損組 件等）

• 定期更換電動助吸器的濾芯

02 可重現(xiàn)性

培養(yǎng)參數(shù)、細(xì)胞處理、細(xì)胞接種和細(xì)胞活性也會影響細(xì)胞培養(yǎng)實驗的可重現(xiàn)性。對于儀器，用戶必須驗證以下幾點：

• 制造商技術(shù)規(guī)格：系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差

• 移液器的完整性：確保無部件缺失或破損、內(nèi)部腐蝕等

• 定期校準(zhǔn)服務(wù)：服務(wù)時間間隔越短，早發(fā)現(xiàn)破損情況的幾率就越高，移液器的使用也就越符合規(guī)范

03 速度和效率

在細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中，務(wù)必迅速操作以保持細(xì)胞活性并避免細(xì)胞過長時間暴露在次優(yōu)條件下。這對于精細(xì)細(xì)胞系或已經(jīng)受到壓力的細(xì)胞尤其重要?。ɡ鐝哪X組織中分離出的原代神經(jīng)元）

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