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詳細(xì)介紹
AMV來(lái)源重組逆轉(zhuǎn)錄酶
本產(chǎn)品是來(lái)源于大腸桿菌表達(dá)的Avian Myeloblastosis Virus（AMV）的重組逆轉(zhuǎn)錄酶，酶活性高，能夠高靈敏度地檢測(cè)出RNA。
該酶在引物存在時(shí)，以單鏈RNA和單鏈DNA作為模板合成DNA。由于它具有解鏈活性和分解雙鏈RNA-DNA中RNA的RNase H活性，因此可以高效地進(jìn)行RT-PCR?？蓱?yīng)用于first strand cDNA合成、制備cDNA探針、RT-PCR。
◆特點(diǎn)
● 高靈敏度檢測(cè)RNA
● 長(zhǎng)鏈RNA的逆轉(zhuǎn)錄
● 熱穩(wěn)定性高
● GC-rich RNA的逆轉(zhuǎn)錄
◆應(yīng)用
● RT-LAMP法
● 合成first strand cDNA
● 制備cDNA探針
● 應(yīng)用于RT-PCR
來(lái)源 | Escherichia coli (Recombinant) |
活性 | 20 units/μL |
反應(yīng)溫度 | 42°C-65°C |
單位定義 | 1 unit指以poly(A)/(dT)15為模板/底物，在37°C，10 min的條件下將1 nmol 的脫氧核糖核苷酸攝入酸不溶性沉淀物中的活性 |
純度試驗(yàn) | DNase試驗(yàn)、RNase試驗(yàn) |
◆產(chǎn)品組成
AMV Reverse Transcriptase （500 units）
組成內(nèi)容 | 包裝 | 儲(chǔ)存 | 備注 |
AMV Reverse Transcriptase (20 units/μL) | 500 units × 1 | -20°C | 200 mmol/L磷酸鈣（pH 7.2，25°C）， 2 mmol/L DTT、0.2% Triton X-100, 50% Glycerol |
5xAMV RT Reaction Buffer | 1 mL× 1 | -20°C | 250 mmol/LTris-HCl（pH 8.5，25°C）、 150 mmol/LKCl, 40 mmol/L MgCl2 |
◆應(yīng)用實(shí)例
實(shí)驗(yàn)案例 Isothermal Master Mix合用（高靈敏檢測(cè)RNA）
用ISOGEN從感染瓜類(lèi)褪綠黃化病毒（簡(jiǎn)稱(chēng)CCYV）的蜜瓜葉中提取RNA，將提取的RNA溶液作為模板使用。用等溫基因擴(kuò)增試劑Isothermal Master Mix和一組引物擴(kuò)增目標(biāo)區(qū)域，然后用等溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)裝置Genie® II檢測(cè)出了CCYV RNA。
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<反應(yīng)條件>
Isothermal Master Mix 15 μL
AMV RT 0.25 units
引物 2.5 μL
模板RNA 2 μL
反應(yīng)體積 25 μL
擴(kuò)增： 63°C 30 min
※ 檢測(cè)瓜類(lèi)褪綠黃化病毒的引物為獨(dú)立行政法人農(nóng)業(yè)、食品產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究機(jī)構(gòu)九州沖繩農(nóng)業(yè)研究中心在推進(jìn)新農(nóng)林水產(chǎn)政策的實(shí)用
※ 技術(shù)開(kāi)發(fā)產(chǎn)業(yè)“開(kāi)發(fā)以粉虱為媒介的新型瓜類(lèi)蔬菜病毒病的綜合性防治技術(shù)系統(tǒng)”中開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品。
結(jié)果
由于Isothermal Master Mix中含有的DNA聚合酶具有逆轉(zhuǎn)錄活性，即使不添加逆轉(zhuǎn)錄酶也能檢測(cè)出RNA，但通過(guò)添加本產(chǎn)品，可提高檢測(cè)速度。另外，模板RNA量為0.5 ng時(shí)也能使目標(biāo)區(qū)域擴(kuò)增（綠色實(shí)線(xiàn)）。
備注
本產(chǎn)品為實(shí)驗(yàn)研究用試劑。不可作為醫(yī)藥品使用。
◆產(chǎn)品列表
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝 |
311-07501 | AMV逆轉(zhuǎn)錄酶 | 500 units |
◆相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝 |
316-08151 | GeneAce Reverse Transcriptase | 10,000 units |
312-08153 | 10,000 units × 5 | |
313-08161 | M-MLV Reverse Transcriptase | 10,000 units |
319-08163 | 10,000 units × 5 |