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V8蛋白酶

別名：Endoproteinase Glu C，Staphylococcal Protease Protease V8

CAS NO：66676-43-5

EC NO：3.4.21.19

分子量：約27000

外觀：白色的結(jié)晶或結(jié)晶性粉末

◆摘要

    （蛋白質(zhì)工程學(xué)試劑）（氨基酸序列分析試劑）（序列分析酶）

      在溫和條件下進(jìn)行蛋白多肽鏈的切斷，不會引起氨基酸殘基側(cè)鏈的修飾（氧化、鹵化、脫酰胺等）。而且，被修飾殘基（糖鏈、類脂體、磷酸、硫酸等的結(jié)合部位）的肽一般以完整形態(tài)被回收，而且具有良好的回收率。如果采用同樣的消化條件可以實現(xiàn)高再現(xiàn)性的分段。使用底物特異性高的酶進(jìn)行蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)分析，可預(yù)測氨基酸組成的大體片段數(shù)和平均大小，并且重要的是可以避免由于部分切斷（非特異性切斷），導(dǎo)致分離的復(fù)雜化。

      本品由Drapeau系列的Staphylococcus aureus（V8菌株）分離而成，是特異性切斷谷酰胺產(chǎn)的羧基側(cè)鏈的酶。分別切斷磷酸系列緩沖液中包含谷氨酸及天冬氨酸羧基側(cè)鏈、氨系列緩沖液中包含谷氨酸羧基側(cè)鏈的肽結(jié)合酯結(jié)合。因為其高底物特異性，本品被用于各種蛋白質(zhì)序列分析時的肽分段。

◆特異性

      切斷氨緩沖液中包含谷氨酸羧基側(cè)鏈的肽結(jié)合和酯結(jié)合。切斷磷酸緩沖液中包含谷氨酸及天冬氨酸羧基側(cè)鏈的肽結(jié)合和酯結(jié)合。 

活性：20 units/mg以上

單位的定義：以2-Phe-Leu-Glu-4-NA為底物，在pH7.8，25℃情況下，1分鐘生產(chǎn)1 μmol 4-硝基苯胺所需酶的量為1 unit。

反應(yīng)：特異性切斷谷氨酸的羧基側(cè)鏈。

◆使用方法

僅切斷谷氨酸羧基

      在0.01~0.1 mol/L碳酸氫銨（pH7.8）或者在0.01~0.1 mol/L醋酸銨（pH4.0）中，酵素：底物（mol/mol）=1：30~100，在30~37℃情況下，分解2~24小時。

同時切斷天冬氨酸羧基

      在0.01~0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH7.8）中，以同樣條件分解。

用途：各種蛋白質(zhì)的序列分析的肽分段。

pH情況：

.佳pH：在pH3.5~9.5范圍有蛋白酶活性。pH4.0及pH7.8時，活性大（以血紅蛋白為底物）。

抑制情況：主要抑制劑：DFP

◆使用上應(yīng)注意

穩(wěn)定性

      pH值為4~10時，物質(zhì)穩(wěn)定。冷凍干燥或冷凍，保存時間較長。在0.2%的SDS中，具有*活性：在4 mol/L尿素中，具有50%活性。

◆產(chǎn)品列表