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細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
點(diǎn)擊次數(shù)：2324 發(fā)布時(shí)間：2021-12-15
細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養(yǎng)條件等），使之生存、生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)關(guān)鍵的過(guò)程，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)?？寺 ＜?xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，這是克隆技術(shù)必要的環(huán)節(jié)，而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù)，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞，又可以借此研究細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝、細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖等。
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室組建的基本要求:
1、細(xì)胞培養(yǎng)是一種無(wú)菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無(wú)微生物污染和不受其它有害因素的影響。
2、細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無(wú)煙塵。
3、細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無(wú)菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，為10萬(wàn)級(jí)潔凈環(huán)境的潔凈室。而洗刷消毒工作設(shè)在潔凈室外，避免物品污染潔凈室內(nèi)環(huán)境。細(xì)胞潔凈室需要一個(gè)空調(diào)系統(tǒng)并對(duì)外界保持一定的正壓。
4、解剖實(shí)驗(yàn)室主要用于對(duì)器官組織的分離，需要有無(wú)菌操作臺(tái)、解剖顯微鏡、各種手術(shù)器材等組織細(xì)胞培養(yǎng)室除一般實(shí)驗(yàn)室的普通常規(guī)設(shè)備外，尚有一些特殊需要的設(shè)備?；究煞譃閮纱箢悾?/strong>
I. 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常用的基本儀器設(shè)備
1.顯微鏡：倒置顯微鏡——是組織細(xì)胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一，便于掌握細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并觀察有無(wú)污染等。
2.培養(yǎng)箱：體外培養(yǎng)的細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞一樣，需要在恒定的溫度下生存，大多數(shù)情況下，最適溫度是37℃，溫差變化一般不應(yīng)超過(guò)±0.5℃，細(xì)胞在溫度升高2℃ 時(shí)，持續(xù)數(shù)小時(shí)即不能耐受，40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱，如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱。
3.干燥箱：用于細(xì)胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等須干熱消毒。
4.水純化裝置：細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)水的質(zhì)量要求較高，細(xì)胞培養(yǎng)以及與細(xì)胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴(yán)格純化處理。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水：即使是用于玻璃器皿的沖洗，也應(yīng)使用二次以上蒸餾水。
5.冰箱：細(xì)胞培養(yǎng)室必須配備。
a、普通冰箱或冷藏柜——儲(chǔ)存培養(yǎng)液、生理鹽水等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標(biāo)本。
b、低溫冰箱（-20℃）——用于儲(chǔ)存需要冷凍保存生物活性及較長(zhǎng)時(shí)期存放的制劑，如酶、血清等。
6.細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器：儲(chǔ)存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購(gòu)置液氮容器時(shí)要綜合考慮容積大小，取放使用方便及液氮揮發(fā)量（經(jīng)濟(jì)）三種因素。
7.離心機(jī)：進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，常規(guī)需要進(jìn)行制備細(xì)胞懸液、調(diào)整細(xì)胞密度、洗滌、收集細(xì)胞等工作，通常需要使用實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)。一般可常規(guī)配置4000rpm的臺(tái)式離心機(jī)，例如細(xì)胞沉降，使用低速離心機(jī)即可，離心力過(guò)大有時(shí)可能引起細(xì)胞的損傷。
8.天平：常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
9.消毒器：一般為高壓蒸汽滅菌鍋，直接或間接與細(xì)胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。
10.濾器：目前細(xì)胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液，包括人工合成培養(yǎng)液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長(zhǎng)因子等物質(zhì)，這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能，因而上述液體多采用濾過(guò)消毒以除去細(xì)菌。目前常使用的濾器有玻璃濾器和微孔濾器，各種濾器有其使用原理和特點(diǎn)。
培養(yǎng)瓶：由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)、繁殖細(xì)胞。進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞，膠塞多用于密封培養(yǎng)。
培養(yǎng)皿：由玻璃或塑料制成，供盛取、分離、處理組織或做細(xì)胞毒性、集落形成、單細(xì)胞分離、同位素?fù)饺搿⒓?xì)胞繁殖等實(shí)驗(yàn)使用。常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有 10cm、9cm、6cm、3.5cm等。
多孔培養(yǎng)板：為塑料制品?？晒┘?xì)胞克隆及細(xì)胞毒性等各種檢測(cè)實(shí)驗(yàn)使用。其優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約樣本及試劑，可同時(shí)測(cè)試大量樣本，易于進(jìn)行無(wú)菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格，常用的規(guī)格有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
II、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室特殊設(shè)備
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室除了應(yīng)配備上述的常用基本設(shè)備以外，如有條件，可添置一些特殊或先進(jìn)的設(shè)備儀器，以便更有效、更精確、更深入地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室工作。例如：
（1）酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀——可用于進(jìn)行免疫學(xué)測(cè)定及細(xì)胞毒性、藥物敏感性檢測(cè)等。
（2） 超低溫冰箱（-80℃）——便于儲(chǔ)存某些試劑及標(biāo)本。
（3）旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器——用于某些特殊細(xì)胞或需要收獲大量細(xì)胞的培養(yǎng)。
（4） 熒光顯微鏡——進(jìn)行熒光染色樣本的觀察。
（5） 流式細(xì)胞儀——可更精確及快速檢測(cè)細(xì)胞。
（6）用于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)條件的各種儀器，例如專門為快速分析細(xì)胞培養(yǎng)基中主要或關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)成分、代謝產(chǎn)物及氣體含量設(shè)計(jì)的多功能細(xì)胞培養(yǎng)分析儀、手提式CO2濃度測(cè)定儀等。
2 細(xì)心+實(shí)驗(yàn)條件允許
3 培養(yǎng)細(xì)胞需要有備份的條件下去嘗試新的培養(yǎng)方式，否則實(shí)驗(yàn)失敗了導(dǎo)致細(xì)胞株也沒(méi)了。實(shí)驗(yàn)記錄詳細(xì)完整也是很關(guān)鍵的
4.選擇合適的實(shí)驗(yàn)室儀器。