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大鼠防御素D-5試劑盒
大鼠防御素D-5試劑盒通常指的是大鼠防御素 5（D-5）ELISA 試劑盒，以下是關于它的詳細介紹：
基本信息
用途：用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中防御素 5（D-5）的含量，僅限科研使用，不得用于臨床診斷15。
保存條件：一般需在 2-8℃避光保存，有效期通常為 6 個月5。
實驗原理1
試劑盒組成1
48 孔配置：說明書 1 份、封板膜 2 片、密封袋 1 個、酶標包被板 1×48、標準品（720ng/L）0.5ml×1 瓶、標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶、酶標試劑 3ml×1 瓶、樣品稀釋液 3ml×1 瓶、顯色劑 A 液 3ml×1 瓶、顯色劑 B 液 3ml×1 瓶、終止液 3ml×1 瓶、濃縮洗滌液（20ml×20 倍）×1 瓶。
96 孔配置：說明書 1 份、封板膜 2 片、密封袋 1 個、酶標包被板 1×96、標準品（720ng/L）0.5ml×1 瓶、標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶、酶標試劑 6ml×1 瓶、樣品稀釋液 6ml×1 瓶、顯色劑 A 液 6ml×1 瓶、顯色劑 B 液 6ml×1 瓶、終止液 6ml×1 瓶、濃縮洗滌液（20ml×30 倍）×1 瓶。
樣本處理5
血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉 / 分），仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉 / 分），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉 / 分），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉 / 分），仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS（pH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右，通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉 / 分），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
組織標本：切割標本后，稱取重量，加入一定量的 PBS（pH7.4），用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?2-8℃的溫度，加入一定量的 PBS（pH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉 / 分），仔細收集上清，分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
操作步驟1
標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔，在第一、第二孔中分別加標準品 100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九、第十孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第九、第十孔中各取 50μl 棄掉。
配液：將 30（48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30（48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。
加樣：分別設空白孔、待測樣品孔。在空白孔中加樣品稀釋液 100μl，在待測樣品孔中先加待測樣品 10μl，再加樣品稀釋液 90μl，然后除空白孔外，各孔中加入酶標試劑 100μl，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
洗滌：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。
顯色：每孔加入顯色劑 A 液、B 液各 50μl，37℃避光孵育 15min。
終止：每孔加入終止液 50μl，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。
注意事項5
當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。
洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
一次加樣時間好控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
請每次測定的同時做標準曲線，好做復孔。
如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。
在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。
底物請避光保存。
不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
