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大鼠細(xì)胞間粘附分子1試劑盒

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產(chǎn)品型號(hào):

品       牌:其他品牌

廠商性質(zhì):代理商

所  在  地:上海市

更新時(shí)間:2025-03-12 13:57:36瀏覽次數(shù):688

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大鼠細(xì)胞間粘附分子1試劑盒多為 ELISA 法,能測(cè)血清等標(biāo)本中該分子含量,操作有步驟規(guī)范,檢測(cè)時(shí)需留意諸多注意事項(xiàng) 。

大鼠細(xì)胞間粘附分子1試劑盒

大鼠細(xì)胞間粘附分子1試劑盒主要有 ELISA 試劑盒和化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒等類(lèi)型,以下以 ELISA 試劑盒為例介紹:

檢測(cè)原理


通常采用雙抗體夾心法。將純化的大鼠抗細(xì)胞間粘附分子 1 抗體包被于微孔板,制成固相抗體,加入含細(xì)胞間粘附分子 1 的樣品,再與 HRP 標(biāo)記的 ICAM-1 抗體結(jié)合,形成抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)洗滌后加底物 TMB 顯色,TMB 在 HRP 酶催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,在酸作用下轉(zhuǎn)化為黃色,顏色深淺和樣品中的細(xì)胞間粘附分子 1 呈正相關(guān),用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中 ICAM-1 含量。

標(biāo)本類(lèi)型


血清、血漿、細(xì)胞上清液、腦脊液、腹腔液等。

操作步驟


以慧嘉生物的試劑盒為例:

  1. 進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣,設(shè)置不同濃度梯度。

  2. 加樣,分別設(shè)空白孔、待測(cè)樣品孔,加樣至酶標(biāo)板孔底部并輕輕混勻。

  3. 用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

  4. 將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。

  5. 小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。

  6. 每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

  7. 再次 37℃溫育。

  8. 重復(fù)洗滌步驟。

  9. 每孔先加入顯色劑 A 50μl,再加入顯色劑 B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 15 分鐘。

  10. 每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)。

  11. 以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度。

注意事項(xiàng)


  1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。

  3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,一次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi)。

  4. 標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高時(shí),需先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)乘以總稀釋倍數(shù)。

  5. 封板膜只限一次性使用。

  6. 底物請(qǐng)避光保存,嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作,試驗(yàn)結(jié)果以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。


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