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樣本準(zhǔn)備：血清樣本采集后，需在 1000×g 的條件下離心 10 分鐘，小心分離出血清；血漿樣本同樣按此離心條件處理，注意不同抗凝劑對(duì)實(shí)驗(yàn)可能產(chǎn)生的影響，需嚴(yán)格按照要求選擇抗凝劑；組織勻漿制備時(shí)，將適量組織與勻漿緩沖液按比例混合，使用勻漿器充分研磨，隨后以 1000×g 離心 10 分鐘，取上清備用；細(xì)胞培養(yǎng)上清液則直接以 1000×g 離心 10 分鐘，去除細(xì)胞碎片等雜質(zhì)。若樣本不立即使用，應(yīng)分成小份，在 - 20℃或 -80℃環(huán)境下保存，防止反復(fù)凍融，使用前需在室溫下緩慢充分解凍并確保均勻。
試劑準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒后，將所有試劑在室溫下平衡 30 - 60 分鐘，使試劑溫度與室溫一致，并充分混勻。按照說(shuō)明書(shū)要求，用蒸餾水將濃縮緩沖液、顯色劑等試劑準(zhǔn)確稀釋成工作液。同時(shí)，依據(jù)實(shí)驗(yàn)所需檢測(cè)的樣本數(shù)量，確定反應(yīng)管或酶標(biāo)板的使用量，標(biāo)準(zhǔn)品孔和空白孔建議設(shè)置復(fù)孔，以提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。
加樣：在反應(yīng)管或酶標(biāo)板上精確設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、空白孔與待測(cè)樣本孔。向標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入適量不同活性濃度的精/氨酸酶標(biāo)準(zhǔn)品溶液，濃度梯度需嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行配置；待測(cè)樣本孔加入適量處理好的樣本；空白孔則加入等量的緩沖液替代樣本。加樣時(shí)，務(wù)必使用微量加樣器，并確保加樣量準(zhǔn)確，將樣本或標(biāo)準(zhǔn)品加于反應(yīng)管或酶標(biāo)板孔底部，盡量避免觸及管壁或孔壁，加樣后輕輕振蕩，使液體充分混勻。
反應(yīng)與顯色：向各孔中加入適量的 L - 精/氨酸底物溶液，輕輕混勻后，將反應(yīng)管或酶標(biāo)板置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱中溫育一定時(shí)間（具體溫育時(shí)長(zhǎng)參照試劑盒說(shuō)明書(shū)），使精/氨酸酶與底物充分反應(yīng)。溫育結(jié)束后，向各孔中依次加入適量的顯色劑，輕輕振蕩混勻，避免產(chǎn)生氣泡，在室溫下避光顯色 15 - 20 分鐘。
檢測(cè)與計(jì)算：顯色反應(yīng)結(jié)束后，立即使用酶標(biāo)儀在 540nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的 OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中精/氨酸酶的活性。若樣本進(jìn)行過(guò)稀釋，還需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到實(shí)際活性。
試劑盒中的所有試劑在使用前必須充分平衡至室溫，避免因溫度差異影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時(shí)，試劑使用后應(yīng)及時(shí)放回冰箱冷藏保存，防止試劑變質(zhì)。
樣本采集、處理過(guò)程務(wù)必嚴(yán)格遵循規(guī)范操作，防止樣本受到污染或發(fā)生溶血、脂血等情況，以免干擾檢測(cè)結(jié)果。如血清樣本應(yīng)避免溶血，紅細(xì)胞溶解可能釋放出影響精/氨酸酶活性檢測(cè)的物質(zhì)。
反應(yīng)過(guò)程中的溫度、時(shí)間以及試劑添加量等條件需嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行，任何偏差都可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)誤差。
加樣操作要精準(zhǔn)、迅速，盡量縮短各孔之間的加樣時(shí)間間隔，保證實(shí)驗(yàn)條件的一致性。使用加樣器時(shí)，需定期校準(zhǔn)，確保加樣量的準(zhǔn)確性。
顯色反應(yīng)過(guò)程需嚴(yán)格控制時(shí)間和避光條件，避免光線直射，以保證顯色效果的穩(wěn)定性。加入顯色劑后應(yīng)盡快進(jìn)行 OD 值測(cè)定，一般建議在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成，防止結(jié)果出現(xiàn)偏差。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用的所有耗材，如反應(yīng)管、酶標(biāo)板、吸頭、試管等，應(yīng)確保無(wú)污染且質(zhì)量可靠，避免對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。
若對(duì)檢測(cè)結(jié)果存在疑問(wèn)或出現(xiàn)異常情況，應(yīng)及時(shí)檢查實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程、試劑狀態(tài)以及儀器性能等，必要時(shí)可重復(fù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。