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驗(yàn)地點(diǎn)：中科院生物物理所生物大分子國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

用戶：常文瑞組

 

實(shí)驗(yàn)方法

1、破碎前的準(zhǔn)備：

   0.1g菌體（本實(shí)驗(yàn)以0.1g菌體為例）；

   直徑3號(hào)陶瓷珠；

   研磨機(jī)（選用品牌上海凈信科技TS-24）；

   預(yù)處理好的2ML研磨管；

   模塊冷凍。
 

2、研磨： 

   0.1g菌體，5000r/min離心1 min后去上清，加入等體積的玻璃珠，加入0.5ML PBS溶液，放入預(yù)先冷凍好的模塊中，放入上海凈信科技的研磨機(jī)中，調(diào)整頻率為60Hz，震蕩時(shí)間60s.

  注：破菌效率隨著液體體積的增加而增加，液體體積達(dá)到100ul時(shí)開(kāi)始達(dá)到zui大破菌效率。

  附：陶瓷珠回收，以下是方法：

      1、將含陶瓷珠的EP管，放置在大燒杯中，用自來(lái)水中浸泡2－3天。

      2、用鑷子將陶瓷珠和細(xì)胞碎片等全部抖落到燒杯中。靜置待玻璃珠沉淀后，輕輕將上面懸浮的細(xì)胞碎片倒掉，在加水重懸陶瓷珠。

      3、重復(fù)步驟2，4－5次直到所有的細(xì)胞碎片都去除干凈。

      4、加入適量的濃硝酸（將陶瓷珠全部覆蓋即可），浸泡過(guò)夜。

      5、去離子水洗三次，置烘箱中干燥即可。