產(chǎn)品簡介

人成纖維細胞生長因子10（Fibroblast Growth Factor 10, FGF-10）又稱角質(zhì)細胞生長因子2（Keratinocyte Growth Fatcor-2, KGF-2），屬于FGF家族，是一種約20kDa的蛋白質(zhì)，在其N末端附近含有富含絲氨的區(qū)域。它分別與小鼠和大鼠FGF-10具有93%和96%的氨基酸序列同一性。FGF-10被認為在胚胎發(fā)生過程中很重要，也在脂肪生成中起著重要作用。FGF-10在前第二心區(qū)表達，與成纖維細胞生長因子8（FGF-8）一起促進形成心臟動脈極的心臟祖細胞的增殖。

翌圣Human FGF-10 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，用于定量測定血清、血漿和細胞培養(yǎng)上清中的FGF-10。特異性抗FGF-10抗體預(yù)包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本，經(jīng)過孵育，樣本中存在的FGF-10與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測抗體孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中FGF-10的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。

產(chǎn)品信息

組分信息

儲存條件

試劑盒可全置于2~8℃保存，也可按照組分信息中保存條件將試劑依據(jù)要求存放，避免污染與反復(fù)凍融，稀釋成工作濃度試劑即用即棄，不可重復(fù)使用。有效期1年。

表1. 使用后試劑保存表

使用說明

1. 用于定量檢測血清、血漿和細胞培養(yǎng)上清中FGF-10含量。

2. 使用本品前，請詳細閱讀說明書。

注意事項

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

3. 試劑盒需在保質(zhì)期內(nèi)使用完畢。禁止不同批次的相關(guān)試劑進行混用。

4. 本產(chǎn)品僅能夠應(yīng)用于檢測說明書中標注的靶點抗原與樣本。其它應(yīng)用需經(jīng)使用者設(shè)計驗證后，根據(jù)結(jié)果評估使用的可靠性與準確性。

5. 不要混合或替代其他試劑盒批次的試劑或材料的供應(yīng)商。

常見技術(shù)提示

1. 樣本OD值高于S1 OD值時，應(yīng)在適當(dāng)?shù)臉悠废♂屢褐羞M一步稀釋。

2. 混合時避免產(chǎn)生泡沫。

3. 在添加標準品、樣本和其他時，要及時更換槍頭，避免交叉污染。

4. 在孵育期間，保證酶標板適當(dāng)密封或封板膜覆。

5. 請在清洗步驟中清除所有溶液和緩沖液。

6. 在溶解標準品之前，請勿將標準品管隨意倒置。當(dāng)將標準品管倒置后，加入緩沖液后請充分上下混勻，然后低速離心。

7. 在實驗過程中，試劑按照說明書要求放置。

8. 在實驗完成后及時丟棄緩沖液，即用即棄。

9. 不同產(chǎn)品的試劑盒組分不同，不可交叉使用。

其他準備材料 

1. 酶標儀，在450 nm測量吸光度(參考波長630 nm)。

2. 恒溫箱、自動微孔洗板機。

3. 移液器，1 μL到1 mL移液槍與配套槍頭。

4. 100 mL和1 L刻度量筒。

5. 標準品或樣品稀釋試管。

6. 吸水紙。  

7. 蒸餾水或去離子水。

8. 計算機及分析軟件。

實驗前準備

1. 樣本收集與處理

1) 細胞培養(yǎng)上清：1,000×g離心10分鐘去除沉淀物，即刻檢測，或者分裝，-20℃以下保存。

2) 血清樣本：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管收集血清。血樣凝集30分鐘后，1,000×g離心10分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測，或者分裝，-20℃以下保存。

3) 血漿樣本：EDTA、枸櫞酸或肝素抗凝收集血漿樣本。1,000×g離心30分鐘收集樣本。即刻檢測，或者分裝，-20℃以下貯存。

本試劑盒可能適用于其它生物學(xué)樣本。血清、血漿和細胞培養(yǎng)上清已經(jīng)過驗證。

注意：檢測前，樣本中可見的沉淀必須去除。不要使用嚴重溶血或高血脂的樣本。樣本應(yīng)分裝并貯存于-20℃，以避免FGF-10活性的丟失。如果在24小時內(nèi)檢測，樣本可以存放在2-8℃，避免樣本的反復(fù)凍融。在檢測前，冷凍樣本應(yīng)緩慢地恢復(fù)至室溫(25 ℃±3℃)，輕柔地混勻。

如果樣本需要稀釋，請使用的樣本緩沖液進行稀釋。

建議正常的血清/血漿樣本(僅供參考）：使用樣品稀釋液1：1稀釋

建議細胞培養(yǎng)上清(僅供參考）：原液

因樣本所含有目標蛋白的含量有差異，每個樣本的稀釋比例建議根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果或按實際情況判定。

2. 酶標板準備

酶標板在使用之前需恢復(fù)室溫。 未使用的板條應(yīng)及時放入干燥劑密封后儲存在2-8°C，建議每個樣本復(fù)孔實驗。

3. 試劑準備

使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復(fù)室溫。為了保證實驗的準確性，請在使用前15分鐘內(nèi)完成。

1) 1 ×洗液 配制：濃縮液平衡至室溫，充分溶解，不要有結(jié)晶。混勻，取25 mL 20×洗液至蒸餾水中，然后定容到500mL；具體配制體積，可按照每次使用量進行配制。

2) 檢測抗體 配制：使用離心20秒，然后用抗體稀釋液以1：100稀釋至工作濃度使用，如：取60μL定容至6mL 抗體稀釋液；具體配制體積，可按照每次使用量進行配制，充分混勻。

3) 酶結(jié)合物 配制：使用離心20秒，然后用酶稀釋液以1：200稀釋至工作濃度使用，如一次吸取30 μL，用抗體/酶稀釋液稀釋至6mL；具體配制體積，可按照每次使用量進行配制，充分混勻。

標準品曲線的制備：準備7個無菌的1.5mL離心管，按照標準品濃度依次進行標記。S1制備：取一支標準凍干品用樣品稀釋液按標簽標示量溶解，充分混勻，即標記其為64 ng/mL。各離心管分別加入300μL 1 ×樣品稀釋液，先取300μL S1，加至第一個離心管中充分混勻后，再取300μL至下一個標記濃度的離心管中，充分混勻，進行一列2倍梯度稀釋標準品，起始最高濃度標記為64 ng/mL，濃度為1 ng/mL，可按照下面的配制方法來進行。每次試驗均需制備相應(yīng)的標準曲線，不同試劑盒以及不同時間的標準曲線不能混用。樣本測試時，每個孔所需標準品量為100μL，注意配制體積要高于所需體積，避免使用量不足。

表2. FGF-10標準品體系配制（1 - 64 ng/mL）

實驗方法

使用前所有試劑及待測樣本需要恢復(fù)室溫。強烈建議所有的標準品和待檢樣本進行復(fù)孔測定。

1.試劑準備：備好各種待測試劑、稀釋好的標準品和待測樣本。

2.酶標板條確定：計算待測樣本和標準品所需酶標板條，將酶標板條從鋁箔袋取出，剩余酶標板條放回鋁箔袋中并封好袋口，低溫保存。

3.浸泡酶標板：加入1×洗液(350 μL/孔)浸泡酶標板，靜置30秒后棄去孔中液體，拍干酶標板。液量對試驗結(jié)果有重要影響，確保最后一次拍板沒有洗液殘留。

4.加樣孵育：加入各梯度標準品和已稀釋待測樣本，100 μL/孔，確保15分鐘內(nèi)完成點樣，室溫孵育2小時。

5.清洗酶標板：棄去孔中液體，加入1×洗液(350 μL/孔) 洗板5次，拍干酶標板。

6.檢測抗體孵育：將預(yù)先配制至工作濃度的檢測抗體加入酶標板中，100 μL/孔，室溫孵育2小時。

7.清洗酶標板：棄去孔中液體，加入1×洗液(350 μL/孔) 洗板5次，拍干酶標板。

8.酶結(jié)合物孵育：將預(yù)先配制至工作濃度的酶結(jié)合物加入酶標板中，100 μL/孔，室溫孵育20分鐘。

9.清洗酶標板：棄去孔中液體，加入1×洗液(350 μL/孔) 洗板5次，拍干酶標板。

10.顯色：使用前分鐘將底物液恢復(fù)至室溫，將底物液加入酶標板中，100 μL/孔，室溫避光孵育15分鐘。

11.終止：加入50 μL/孔終止液至酶標板中，此時顏色由藍轉(zhuǎn)黃，輕輕震動酶標板至顯色均勻。

12.讀值：10分鐘內(nèi)讀取450 nm/630 nm的光吸收值。

標曲制定

計算標準品和樣本復(fù)孔的平均OD值，并減去空白孔的平均OD值作為校準OD值。以標準品濃度的對數(shù)為橫坐標，校準OD值的對數(shù)為縱坐標繪制標準曲線。多種繪圖和統(tǒng)計學(xué)軟件可以用于輔助繪制標準曲線并進行未知樣本濃度的計算。四參數(shù)擬合法往往擬合效果較好，其它方法如線性擬合也可能獲得較好擬合結(jié)果，需要根據(jù)具體實驗數(shù)據(jù)進行分析。

實驗數(shù)據(jù)

1. 標曲數(shù)據(jù)

數(shù)據(jù)擬合繪制標準曲線，生成的標曲用于實驗數(shù)據(jù)分析。

2. 靈敏度檢測

FGF-10的檢測限為0.69 ng/mL，通過使用重復(fù)檢測20次零孔OD值的均值與標準差計算得出。

3. 精密度檢測

酶標板內(nèi)精密度

3個已知濃度的樣本酶標板內(nèi)重復(fù)測定8次，評估酶標板內(nèi)的精密度。

酶標板間精密度

3個已知濃度的樣本酶標板間重復(fù)檢測24次，評估酶標板間的精密度。

4. 回收率檢測

 通過不同水平的FGF-10添加于樣本中來測定回收率，其回收率如下:

5. 稀釋線性檢測

6. 樣本值

應(yīng)用本試劑盒，檢測若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。

n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內(nèi)得1 ng/mL

7. 測定特異性

本試劑盒識別天然和重組FGF-10，沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。

檢測簡圖

疑問解答