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Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | 價(jià)格（元） |
Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶 | 10615ES76 | 500 U | -20℃ | 1256.00 |
Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶 | 10615ES84 | 2000 U | -20℃ | 3856.00 |
10615ES92 | 10000 U | -20℃ | 14856.00 |
產(chǎn)品描述
真核生物中mRNA經(jīng)轉(zhuǎn)錄后修飾在5端形成一個(gè)特殊結(jié)構(gòu)，即帽子結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)對mRNA的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運(yùn)與翻譯過程均有較重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子結(jié)構(gòu)的有效酶，其由D1和D12兩個(gè)亞基組成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鳥苷?；D(zhuǎn)移酶活性和鳥嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶活性，可將7-甲基鳥嘌呤帽結(jié)構(gòu)（m7Gppp）連接到RNA的5末端（m7Gppp5N）。牛痘病毒加帽酶，在合適濃度的加帽緩沖液（Capping buffer），鳥苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在條件下，能夠在一個(gè)小時(shí)之內(nèi)對RNA進(jìn)行加帽，效率可達(dá)到100%，并且保證正確的方向。
本品以無菌液體形式提供，可應(yīng)用于體內(nèi)/體外翻譯前mRNA的加帽反應(yīng)或mRNA的5末端標(biāo)記反應(yīng)。
產(chǎn)品性質(zhì)
來源（Source） | 攜帶牛痘病毒加帽酶基因的E. coli |
zui適溫度（Optimum Temperature） | 37℃ |
儲(chǔ)存緩沖液（Storage Buffer） | 20 mM Tris-HCl pH 8.0，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100，50%甘油 |
活性單位定義（Unit Definition） | 37℃條件下，1小時(shí)內(nèi)將10 pmol GTP（α- 32 P）摻入到一條含80個(gè)核苷酸（80 nt）轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上所需要的酶量。 |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年。
注意事項(xiàng)
1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作；
2）所提取的RNA需經(jīng)過純化并使用無核酸酶的水重懸；
3）在加入酶之前需要對RNA溶液進(jìn)行加熱以去除5末端的二級結(jié)構(gòu)；
4）對于已知5末端結(jié)構(gòu)的RNA，可以延長反應(yīng)時(shí)間至60分鐘，提高加帽效率；
5）5末端標(biāo)記反應(yīng)體系中，GTP儲(chǔ)液應(yīng)稀釋為反應(yīng)體系中mRNA摩爾濃度的1-3倍。
使用方法
1. 加帽反應(yīng)
本步驟適用于10 μg RNA（≥ 100 nt）的加帽反應(yīng)，且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大。
1）取10 μg RNA至1.5 mL離心管，使用無核酸酶的水稀釋至15 μL；
2）65℃加熱5分鐘；
3）取出離心管置于冰上5分鐘；
4）依次加入以下組分：
組分 | 體積 |
上述變性的RNA | 15 μL |
10×Capping Buffer | 2.0 μL |
GTP（10 mM） | 1.0 μL |
SAM（2 mM） | 1.0 μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10 U/μL） | 1.0 μL |
【注】：10×Capping Buffer配方為：0.5 M Tris-HCl，pH 8.0；50 mM KCl，10 mM MgCl2，10 mM DTT。
5）37°C孵育30分鐘；
6）RNA加帽完成，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2. 5末端標(biāo)記反應(yīng)
本步驟適用于5末端帶有三磷酸的RNA標(biāo)記，且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大，其標(biāo)記效率受反應(yīng)體系中RNA與GTP摩爾濃度比以及RNA樣本中GTP含量影響。
1）取適量RNA到1.5 mL離心管，使用無核酸酶的水稀釋至14 μL；
2）65℃加熱5分鐘；
3）取出離心管置于冰上5分鐘；
4）依次加入以下組分：
組分 | 體積 |
上述變性的RNA | 14 μL |
10×Capping Buffer | 2.0 μL |
GTP mix | 2.0 μL |
SAM（2 mM） | 1.0 μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10 U/μL） | 1.0 μL |
【注】：GTP mix為GTP和少量標(biāo)記物，其中GTP使用濃度參照注意事項(xiàng)5）。
5）37°C孵育30分鐘；
6）RNA 5末端標(biāo)記完成，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
10603ES05 | Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制劑 | 2 KU | 216.00 |
10603ES10 | Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制劑 | 10 KU | 916.00 |
10603ES20 | Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制劑 | 20 KU | 1695.00 |
10603ES60 | Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制劑 | 100 KU | 11865.00 |
10132ES03 | GTP (100 mM) 鳥苷三磷酸溶液（100 mM） | 1 mL | 486.00 |
20311ES10 | DTT 二硫蘇糖醇 | 10 g | 280.00 |
20311ES60 | DTT 二硫蘇糖醇 | 100 g | 1688.00 |
20311ES80 | DTT 二硫蘇糖醇 | 1 kg | 13499.00 |
60102ES76 | Tris Base 三(羥甲基)氨基甲烷 | 500 g | 108.00 |
60102ES80 | Tris Base 三(羥甲基)氨基甲烷 | 1 kg | 168.00 |
60102ES90 | Tris Base 三(羥甲基)氨基甲烷 | 5×1 kg | 788.00 |
60102ES96 | Tris Base 三(羥甲基)氨基甲烷 | 1桶（25kg） | 3188.00 |
