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*款商業(yè)化的脂多糖（LPS）提取試劑盒
Lipopolysaccharide（LPS）Extraction Kit
產(chǎn)品信息：（現(xiàn)貨供應(yīng)）
貨號 | 名稱 | 產(chǎn)地 | 規(guī)格 | 報價/元 | */元 |
17141 | LPS Extraction Kit 脂多糖提取試劑盒 | iNtRON | 100T | 2680 | 1860 |
試劑盒組成
組分 | 名稱 | 規(guī)格 | 保存方法 |
1 | Lysis Buffer | 1x 100 ml | 2~8℃ |
2 | Purification Buffer | 1x 80ml | 2~8℃ |
LPS背景描述：
◆ 脂多糖（LPS）是革蘭氏陰性菌細胞壁外膜的主要成分，結(jié)構(gòu)很復雜、熱穩(wěn)定性*（在250℃下干熱滅菌2h才*滅活）。受LPS發(fā)現(xiàn)的歷史原因，如今LPS的概念幾乎等同于內(nèi)毒素（endotoxin）。LPS由多糖鏈和脂質(zhì)A組成，不同細菌間的多糖鏈是高度變化的，決定細菌的血清型；而脂質(zhì)A主要影響LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的級聯(lián)反應(yīng)和機體的毒性病理生理活動，包括釋放內(nèi)毒素引起感染性休克從而導致末梢血管虛脫。臨床常通過檢測LPS的存在來診斷腦膜炎。
◆ 正是LPS與機體免疫機能的密切關(guān)系，生命科學研究常常提取LPS進行相關(guān)的研究，如闡明LPS的結(jié)構(gòu)，代謝，免疫學，生理學，毒性，生物合成途徑；誘導生長促進因子如白介素的合成與分泌；誘導疾病研究的動物模型如炎癥反應(yīng)，急性肺損傷，
產(chǎn)品描述：
◆ zui常用的LPS提取方法仍然是Westphal,O. (1965)使用的熱酚-水法（hot phenol-water method），主要優(yōu)勢在于高產(chǎn)量，但是提取步驟繁瑣，費時，以及常受蛋白質(zhì)和核酸的污染，純度低等缺點也常困擾科研工作者。
◆ iNtRON提供的LPS提取試劑盒是市場上的*個商品化的產(chǎn)品，排除傳統(tǒng)熱酚-水法的缺陷，使得科研工作者能夠快速方便的從細菌中提取LPS。
產(chǎn)品優(yōu)勢：
∷ 適用性廣，能從所有G-菌中提取LPS（見Fig. 2）；
∷ 操作時間短（包括裂解在內(nèi)，60min內(nèi)即可完成）；操作簡單方便；
∷ 少量細菌即可獲得足夠的LPS；LPS產(chǎn)量與細菌培養(yǎng)物成正比，一般使用3~5ml培養(yǎng)物LPS產(chǎn)量zui高；細菌*培養(yǎng)體積1~2ml（OD600=0.8-1.2）
∷ LPS產(chǎn)率高，且重復性好（見Fig.1）；
∷ 提取LPS下游應(yīng)用廣，包括直接用于免疫刺激；
操作步驟：
1）室溫離心收獲細菌細胞，13，000rpm，30sec。
2）加入1ml裂解緩沖液（Lysis Buffer），劇烈渦旋混勻。
3）加入200μl氯仿，劇烈渦旋混勻10-20 sec，室溫孵育5min。
4）4℃，13,000rpm離心10min，轉(zhuǎn)移400μl上清到新1.5ml離心管中。
5）加入800μl純化裂解液（Purification Buffer），并混勻。-20℃孵育10min。
6）4℃，13,000rpm離心15min。
7）用1ml 70%EtOH洗滌LPS顆粒，并*干燥。
8）在LPS中加入70μl Tris-HCL（10mM，pH8.0），并超聲。
應(yīng)用圖片：
應(yīng)用文獻：
1） YanH.L, et al. DNA Sequencing and Identification of Serogroup-Specific Genes in the Escherichia coli O118 O Antigen Gene Cluster and Demonstration of Antigenic Diversity But Only Minor Variation in DNA Sequence of the O Antigen Clusters of E. coli O118 and O151. Foodborne Pathogens and Disease. 5(4): 449-457(2008).
2） HA Shui, et al. LPS-evoked IL-18 expression in mesangial cells plays a role in accelerating lupus nephritis. Rheumatology 46:1277–1284(2007).
3） R Bucki, et al..Release of the antimicrobial peptide LL-37 from DNA/F-actin bundles in cystic fibrosis sputum. European Respiratory Journal 29:624-632 (2007).
4） BH.Kim, et al. Effect of retinoids on LPS-induced COX-2 expression and COX-2 associated PGE2 release from mouse peritoneal macrophages and TNF-α release from rat peripheral blood mononuclear cells. Toxicology Letters 150(2):191-201(2004).
5） Anat Lerner, et al. The Azospirillum brasilense Sp7 noeJ and noeL genes are involved in extracellular polysaccharide biosynthesis. Microbiology 155: 4058–4068(2009).
6） Chitrita DebRoy, et al. Multiplex Polymerase Chain Reaction Assay for Detection of Nonserotypable Shiga Toxin–Producing Escherichia coli Strains of Serogroup O147. Foodborne Pathogens and Disease 7(11): 1407-1414(2010).
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