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NGS在腫瘤檢測中的那些事兒一、背景介紹20世紀(jì)以來，癌癥已成為困擾人類健康的主要危害之一。根據(jù)2019年國家癌癥中心發(fā)布的2015年全國//////新癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)，2015年惡性腫瘤發(fā)病約392.9萬人，死亡約233.8萬人。平均每天超1萬人被確診為癌癥，每分鐘7.5個人確診癌癥。癌癥負(fù)擔(dān)呈持續(xù)上升態(tài)勢，近10多年來，惡性腫瘤發(fā)病率每年保持約3.9％的增幅，死亡率每年保持2.5％的增幅。因而腫瘤基因突變檢測對指導(dǎo)腫瘤靶向治療、耐藥監(jiān)測及預(yù)后判斷有重要意義。圖1：中國2015年惡性腫瘤發(fā)病與死亡
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干貨分享|磁珠常見問題與解決方案高通量測序技術(shù)的跨越式發(fā)展，使測序能力大幅上升。在整個NGS工作流程中，磁珠是*的產(chǎn)品。磁珠通過磁顆粒活性基團(tuán)在一定條件下可與核酸結(jié)合和解離的原理，將樣本中目的片段分離?？蓪崿F(xiàn)對核酸樣本的高通量自動化操作，廣泛應(yīng)用于基因測序以及分子診斷領(lǐng)域?？雌饋砗芎唵蔚募兓?分選實驗，卻在實際實驗中有各種意外的情況。那關(guān)于磁珠產(chǎn)品選擇和產(chǎn)品使用方面有什么需要注意的事項呢？接下來小翊將從磁珠的外觀、儲存、應(yīng)用和使用效果逐一對癥分析，希望能幫助大家了解磁珠實驗中的那些事。磁珠外觀Q
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Western blot所必須的內(nèi)參及標(biāo)簽抗體
Westernblot所必須的內(nèi)參及標(biāo)簽抗體——衡量WB成功的標(biāo)尺何為內(nèi)參抗體、何為標(biāo)簽抗體？一內(nèi)參抗體內(nèi)參即內(nèi)部參照（InternalControl），類似于熒光定量實驗的內(nèi)參基因，對于哺乳動物細(xì)胞表達(dá)來說一般是指由看家基因編碼表達(dá)的蛋白(HousekeepingProteins)，它們在不同組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對恒定，常用它作為檢測目的蛋白表達(dá)水平變化時來做參照物。2內(nèi)參抗體的選擇：（1）樣本種屬來源哺乳動物的組織或者細(xì)胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lami -
D-熒光素原理D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，導(dǎo)入研究動物如大、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測光強(qiáng)度變化，從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應(yīng)體
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轉(zhuǎn)鐵蛋白（Transferrin）------無血清細(xì)胞培養(yǎng)添加物背景介紹轉(zhuǎn)鐵蛋白又名運(yùn)鐵蛋白（Transferrin，TRF、Tf），負(fù)責(zé)運(yùn)載由消化管吸收的鐵和由紅細(xì)胞降解釋放的鐵。以三價鐵復(fù)合物（Tf-Fe3+）的形式進(jìn)入骨髓中，供成熟紅細(xì)胞的生成。轉(zhuǎn)鐵蛋白主要存在于血漿中，血漿中的轉(zhuǎn)鐵蛋白供應(yīng)機(jī)體絕大部分組織的鐵，而在其不能到達(dá)的部位，由這些組織自己合成的轉(zhuǎn)鐵蛋白在局部產(chǎn)生轉(zhuǎn)鐵作用。圖1:轉(zhuǎn)鐵蛋白的結(jié)構(gòu)人轉(zhuǎn)鐵蛋白（HumanTransferrin）主要在肝臟合成，是由位于同源N-端和C-端
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免疫球蛋白G（IgG）——模擬抗體活性，神似抗體結(jié)構(gòu)免疫球蛋白免疫球蛋白（Ig）指具有抗體（Ab）活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)，與抗體分子相似的球蛋白。免疫球蛋白是由兩條相同的輕鏈和兩條相同的重鏈通過鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結(jié)構(gòu)。免疫球蛋白分為五類，即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。圖1五類免疫球蛋白結(jié)構(gòu)示意圖IgG簡介免疫球蛋白G（ImmunoglobulinG，IgG）是血清中免疫球蛋白主成分，約占血清中免疫球蛋白總
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qPCR常見問題及解決方案對于從事分子生物學(xué)研究的實驗猿來說，RT-qPCR實驗可謂是老生常談了?？此骑L(fēng)平浪靜，只需“RNA提取-反轉(zhuǎn)錄-熒光定量”這些按部就班的操作，實則險象環(huán)生，一丁點(diǎn)的出錯都有可能讓我們懷疑人生。即便如此，在CNS的召喚下我們?nèi)耘f一遍遍的重復(fù)、重復(fù)、再重復(fù)。小翊深有體會，為此嘔心瀝血整理出來常用的SYBRGreen染料法RT-qPCR實驗的幾個常見問題，并給出了可能的原因和解決方案，希望大家能夠順利度過RT-qPCR大關(guān)。RT-qPCR實驗中，大家或多或少會遇到擴(kuò)增曲線異常
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抗體親和純化系列產(chǎn)品概述ProteinA、ProteinG是常應(yīng)用于抗體親和純化和免疫沉淀的蛋白。將ProteinA、G分別固定在不同的介質(zhì)上，或同時將ProteinA、G共價偶聯(lián)到介質(zhì)表面，是從腹水、細(xì)胞培養(yǎng)物上清和血清中分離IgG和IgG亞家族的有效工具。ProteinL源于細(xì)菌，能更廣泛地結(jié)合各種類型以及亞類的免疫球蛋白，包括所有類型的IgG和單鏈可變區(qū)(ScFv)以及Fab片段。該蛋白只與抗體的kappa鏈結(jié)合而不會影響抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)，這一特性使其與蛋白A或蛋白G相比，能更廣泛地結(jié)合
