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在基因功能研究與藥物開發(fā)領(lǐng)域，精準(zhǔn)解析基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制是探索生命奧秘的關(guān)鍵一步。為滿足科研工作者對高效、可靠檢測工具的需求，我們正式推出雙熒光素酶報告基因檢測服務(wù)！通過的技術(shù)平臺和標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，助您快速驗證啟動子活性、miRNA靶向作用、信號通路調(diào)控等關(guān)鍵問題，讓基因調(diào)控研究更精準(zhǔn)、更高效！
反應(yīng)原理
雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)是指以熒光素（luciferin）和腔腸素（coelenterazine）為底物，檢測螢火蟲熒光素酶（firefly luciferase）和海腎熒光素酶活性的一種雙報告系統(tǒng)。螢火蟲熒光素酶作為報告基因，催化luciferin 氧化成oxyluciferin，在luciferin 氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光；海腎熒光素酶作為內(nèi)參基因，催化coelenterazine 氧化成coelenteramide，在coelenterazine 氧化的過程中，同樣也會發(fā)出生物熒光。通過熒光測定儀測定反應(yīng)過程中釋放的生物熒光或使用酶標(biāo)儀來檢測熒光素酶活性的變化。
圖1.熒光素酶生物發(fā)光化學(xué)反應(yīng)示意圖
為什么選擇雙熒光素酶報告基因檢測？
雙熒光素酶系統(tǒng)（Firefly & Renilla Luciferase）是基因調(diào)控研究的“黃金搭檔"，通過雙信號校正技術(shù)，可有效消除實驗誤差（如細(xì)胞數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率等干擾），顯著提升數(shù)據(jù)穩(wěn)定性和靈敏度。
適用場景
啟動子/增強(qiáng)子活性分析：定位關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域，篩選功能性SNP位點； miRNA與靶基因互作驗證：確認(rèn)miRNA對目標(biāo)mRNA的直接調(diào)控關(guān)系； 信號通路調(diào)控機(jī)制研究：探究轉(zhuǎn)錄因子（如NF-κB、STAT3）對下游基因的調(diào)控作用； 藥物篩選與機(jī)制解析：評估化合物或生物藥對特定基因表達(dá)的調(diào)控效果。
服務(wù)優(yōu)勢
個性化方案設(shè)計：支持載體構(gòu)建、突變體設(shè)計、實驗條件優(yōu)化等全流程服務(wù)； 結(jié)果有保障：團(tuán)隊精通各類應(yīng)用場景驗證，經(jīng)驗豐富，全程提供技術(shù)解讀，售后無憂； 快速交付周期：標(biāo)準(zhǔn)實驗4-5周內(nèi)提供原始數(shù)據(jù)及分析報告。
服務(wù)流程
三步輕松完成實驗
客戶提供
翌圣服務(wù)
方案設(shè)計、序列合成、質(zhì)粒構(gòu)建、轉(zhuǎn)染、報告基因檢測。
項目所得質(zhì)粒及菌液、項目報告。
應(yīng)用案例分享
雙熒光素酶驗證轉(zhuǎn)錄因子與啟動子區(qū)調(diào)控作用
基本原理
轉(zhuǎn)錄因子是一類參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的重要調(diào)節(jié)因子。不同轉(zhuǎn)錄因子的DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域識別不同基因啟動子區(qū)特定的堿基序列，行使抑制或激活該基因轉(zhuǎn)錄的功能。如圖3，將目的基因啟動子區(qū)域（通常取轉(zhuǎn)錄起始位點TSS 上游-2000bp）、或針對結(jié)合位點進(jìn)行突變、或分段截斷序列，構(gòu)建到報告基因載體luciferase 的上游，共轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)質(zhì)粒，通過熒光素酶活反映轉(zhuǎn)錄因子對啟動子活性的調(diào)控作用。
常見載體及分組
常用載體：pGL3-Basic 、pGL3-Promoter
常見檢測分組
1）轉(zhuǎn)錄因子NC + 啟動子對照質(zhì)粒 + 海腎內(nèi)參質(zhì)粒；
2）轉(zhuǎn)錄因子NC + 啟動子野生型質(zhì)粒 + 海腎內(nèi)參質(zhì)粒；
3）轉(zhuǎn)錄因子NC + 啟動子突變型質(zhì)粒 + 海腎內(nèi)參質(zhì)粒；
4）轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒 + 啟動子對照質(zhì)粒 + 海腎內(nèi)參質(zhì)粒；
5）轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒 + 啟動子野生型質(zhì)粒 + 海腎內(nèi)參質(zhì)粒；
6）轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒 + 啟動子突變型質(zhì)粒 + 海腎內(nèi)參質(zhì)粒。
操作流程
1、啟動子報告基因載體構(gòu)建：將目的基因構(gòu)建至雙熒光素酶報告基因載體的上，目的片段位于熒光素酶報告基因的上游，如構(gòu)建至pGL3-basic。
2、轉(zhuǎn)染細(xì)胞：將熒光素酶報告質(zhì)粒與內(nèi)參報告質(zhì)粒和共轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞，由于內(nèi)參的啟動子活性較強(qiáng)，通常報告質(zhì)粒與內(nèi)參質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染比例為10:1。
3、收集細(xì)胞：將裂解液加入細(xì)胞孔中，搖床常溫條件下?lián)u晃適當(dāng)時間后進(jìn)行離心，將上清轉(zhuǎn)移到新的管子中。
4、雙熒光素酶報告基因活性檢測：96 孔酶標(biāo)版中加入20 ul細(xì)胞裂解液上清，加入100 μL螢火蟲螢光素酶反應(yīng)液，震板混勻，檢測螢火蟲螢光素酶的活力，檢測盡量在30 min內(nèi)完成。加入100 μL海腎螢光素酶反應(yīng)液，震板混勻，檢測海腎螢光素酶的活力，檢測盡量在30 min內(nèi)完成。。
5、數(shù)據(jù)處理：首先將Firefly luciferase/Renila luciferase得出比值，即可得到不同處理組的相對luciferase活性。
預(yù)期結(jié)果分析
（1）轉(zhuǎn)錄因子促進(jìn)靶基因啟動子區(qū)轉(zhuǎn)錄活性
（2）轉(zhuǎn)錄因子抑制靶基因啟動子區(qū)轉(zhuǎn)錄活性
服務(wù)內(nèi)容
立即預(yù)約，享上新優(yōu)惠！
即日起至2025年3月31日，首單客戶可享9折優(yōu)惠，同時免費贈送實驗方案設(shè)計服務(wù)！
無論是基礎(chǔ)研究還是藥物開發(fā)項目，我們的雙熒光素酶報告基因檢測服務(wù)都將成為您探索基因調(diào)控機(jī)制的強(qiáng)力工具。
相關(guān)產(chǎn)品清單
產(chǎn)品類別 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品規(guī)格 |
雙熒光素酶報告基因檢測試劑 | Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11402ES60/80 | 100T/1000T |
Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit 輝光型雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11405ES60/80 | 100T/1000T | |
轉(zhuǎn)染試劑 | Hieff Trans® Liposomal Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑 | 40802ES01/03 | 100μL/1mL |
Hieff Trans® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑 | 40806ES01/02/03 | 0.1mL/0.5mL /1mL | |
Hieff Trans® mRNA Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑 | 40809ES01/03 | 0.1mL/1mL |
