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原代細(xì)胞概念、培養(yǎng)步驟、污染預(yù)防
原代細(xì)胞（Primary cells）指采用酶、螯合劑或機械方法直接從活體組織或器官中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機體分離出來到成功傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞；但考慮到原代細(xì)胞可在體外分裂10~15次的特性，以及取材難度大、分離和培養(yǎng)成本高等因素，通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。
原代細(xì)胞離體時間短且未經(jīng)修飾，與體內(nèi)狀態(tài)相似度高，生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化，仍保持了細(xì)胞在體內(nèi)的許多重要標(biāo)志和功能。因此，相比較于細(xì)胞系而言，通過原代細(xì)胞所獲取的實驗數(shù)據(jù)與體內(nèi)生理功能更接近、更能真實反映體內(nèi)環(huán)境。
在生物醫(yī)學(xué)研究中，原代細(xì)胞更適合用于藥物測試、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)化等實驗，而且還可以有效避免涉及動物實驗方面的倫理爭議。在生物制藥方面，原代細(xì)胞也是理想的細(xì)胞模型，可用于疾病機制研究、藥物篩選、藥物代謝和毒理學(xué)研究等。
原代細(xì)胞的完整培養(yǎng)可分為6個步驟：取材、組織分離、細(xì)胞過濾和計數(shù)、接種和培養(yǎng)、傳代與維持、凍存和復(fù)蘇。
原代細(xì)胞對外界環(huán)境非常敏感，實驗環(huán)境的細(xì)微變化都可能影響細(xì)胞的存活和功能。因此，需要嚴(yán)格控制上述實驗的環(huán)境條件，保證在無菌環(huán)境中進行操作，還要控制溫度、濕度和二氧化碳濃度等，從而確保細(xì)胞活力和最佳的培養(yǎng)效果。
在原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中，很容易引發(fā)微生物污染，如：取材階段，由于是從人類或動物組織中分離的，因此易攜帶共生菌群和亞臨床感染等常見的微生物污染源。故在組織獲取、組織解離和細(xì)胞培養(yǎng)等環(huán)節(jié)，均普遍采用抗生素防污染。常用的抗生素包括青霉素、鏈霉素、慶大霉素、兩性霉素B、氨芐青霉素和卡那霉素等。但不建議長期使用抗生素，因為某些試劑（如兩性霉素B）從長期來看可能對細(xì)胞有毒；并且不同抗生素會對細(xì)胞的代謝、增值、分化，甚至是基因表達(dá)都有不同程度的影響。
原代細(xì)胞抗生素的應(yīng)用
已知，抗生素的使用，雖然能預(yù)防原代細(xì)胞污染，但也引入了新的問題。因此，既能確保原代細(xì)胞不受污染，又對細(xì)胞毒害性小的抗生素就成了迫切需求。不僅如此，細(xì)菌、真菌、支原體等的污染也是影響原代細(xì)胞生長和發(fā)揮正常功能的因素，對細(xì)菌、真菌、支原體污染可有效預(yù)防，也是原代細(xì)胞對所需抗生素的硬性要求。
為此，翌圣生物自主研發(fā)了Antimicrobia Agent for Primary Cells原代細(xì)胞抗生素，其是用于原代細(xì)胞培養(yǎng)，無菌過濾，淡黃色溶液，儲存液濃度為50 mg/mL，推薦使用濃度為100-300μg/mL。
該原代細(xì)胞抗生素是一種廣譜抗生素制劑，旨在保護原代細(xì)胞免受微生物污染。原代細(xì)胞細(xì)胞模型很容易受到來自宿主動物或細(xì)胞分離過程中的自然菌群污染。本產(chǎn)品能夠提供全面的微生物污染預(yù)防。它對革蘭氏陽性菌（例如芽孢桿菌和葡萄球菌屬）和革蘭氏陰性菌（例如大腸桿菌，腸桿菌、銅綠假單胞菌和不動桿菌）、支原體和真菌都有抑制作用。
翌圣生物的原代細(xì)胞抗生素可提供的保護原代細(xì)胞，當(dāng)它作用于微生物污染時，具有最小細(xì)胞毒性。本產(chǎn)品由多種抗生素組成，其中三種作用于支原體、革蘭氏陽性和革蘭氏陰性這些化合物靶向DNA旋轉(zhuǎn)酶和原核生物核糖體亞基（30S和50S），因此阻斷DNA和蛋白質(zhì)分別合成。其它成分可以除真菌，包括酵母菌等。
產(chǎn)品特點
廣譜防污染：可以預(yù)防細(xì)菌、真菌（包括酵母菌）、支原體等微生物污染；
強普適性：適用于原代細(xì)胞培養(yǎng)、類器官培養(yǎng)、干細(xì)胞培養(yǎng)等；
多應(yīng)用場景：可在細(xì)胞培養(yǎng)全過程中使用（如培養(yǎng)基、清洗溶液等）；
低細(xì)胞毒性：對細(xì)胞毒性小，可保護原代細(xì)胞的活性和正常生長。
實驗數(shù)據(jù)
通過抑菌實驗，測定原代細(xì)胞抗生素體外抑制微生物生長效力。其中，翌圣原代細(xì)胞抗生素和競品A的使用濃度分別為33、50、100μg/mL。然后將稀釋好的不同濃度梯度的原代細(xì)胞抗生素溶液和提前配制好的細(xì)菌真菌懸液混合，接種于培養(yǎng)基中。在適宜的溫度和濕度條件下進行培養(yǎng)。觀察并記錄細(xì)菌真菌的生長情況，判斷原代細(xì)胞抗生素對細(xì)菌真菌的生長抑制情況。根據(jù)下述結(jié)果，可以看出，翌圣生物的原代細(xì)胞抗生素較競品A，有更好的抑菌效果。
圖1.原代細(xì)胞抗生素對細(xì)菌真菌的抑菌圈實驗
翌圣生物的原代細(xì)胞抗生素處理細(xì)胞后，分別使用CCK-8和細(xì)胞計數(shù)的方式對細(xì)胞活力和增殖情況進行檢測：從下圖可以看出加入原代細(xì)胞抗生素，對細(xì)胞活力和細(xì)胞增殖幾乎無影響。
圖2. 原代細(xì)胞抗生素加入前后細(xì)胞活力和細(xì)胞增殖情況圖
產(chǎn)品信息
類別 | 產(chǎn)品 | 貨號 | 品名 | 規(guī)格 |
微生物污染預(yù)防 | 原代細(xì)胞抗生素 | 40613S | Antimicrobial Agent for Primary Cells 原代細(xì)胞抗生素 | 1mL/5mL/10mL |
支原體預(yù)防試劑 | 40608ES | MycAway™ Prophylactic (2000×) -Mycoplasma Prevention Reagent |
1mL/5×1mL | |
支原體噴霧 | 40605ES | MycAwayl™ Spray (Ready-to-use) | 500mL/2×500mL/10×500mL | |
培養(yǎng)箱支原體 污染預(yù)防 | 40609ES | MycGuard™-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator | 100 mL | |
水浴鍋支原體 污染預(yù)防 | 40610ES | MycGuard™-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath | 100 mL | |
微生物污染檢測 | 支原體檢測 | 40601ES | GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit | 10assays/20assays |
40612ES | MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit | 25T/100T | ||
40614ES | GMyc-PCR Mycoplasma Detection Kit (2G) | 10assays/20assays | ||
40619ES | MycAway® Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit （2G） 支原體qPCR檢測試劑盒（探針法）（2G） | 25T/100T | ||
微生物污染清除 | 支原體去除 | 40607ES | MycAwayl™ Treatment (1000×) - Mycoplasma Elimination Reagent MycAwayl™支原體去除試劑（1000×） | 100μL/1mL/5×1mL |
