近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，基于核酸檢測(cè)的診斷方法已大量建立并廣泛應(yīng)用于人類(lèi)疾病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中。與其他的核酸擴(kuò)增技術(shù)相比，等溫?cái)U(kuò)增有快速、高效、特異的優(yōu)點(diǎn)且無(wú)需專(zhuān)用的設(shè)備，所以它一經(jīng)出現(xiàn)就被許多學(xué)者認(rèn)為是一種有可能與PCR媲美的檢測(cè)方法。

因此，相信恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)為基礎(chǔ)的診斷儀器和試劑盒的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用將會(huì)是未來(lái)分子診斷POCT的一個(gè)新方向。

主流恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)原理介紹

1、LAMP環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

原理：環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（loop mediated isothermal amplification,LAMP）使用具有鏈置換特性的Bst DNA聚合酶，針對(duì)靶基因的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4種特異引物，在等溫條件下高效、快速、特異性擴(kuò)增靶標(biāo)序列，可在60-65℃進(jìn)行恒溫?cái)U(kuò)增，15-60分鐘左右即可實(shí)現(xiàn)109～1010倍的核酸擴(kuò)增。

優(yōu)勢(shì)及應(yīng)用：等溫?cái)U(kuò)增因其反應(yīng)快速、特異高、設(shè)備簡(jiǎn)單易操作、結(jié)果易于鑒定等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)應(yīng)用于病原菌、寄生蟲(chóng)、病毒、疾病和轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)等領(lǐng)域，并且還將廣泛應(yīng)用于臨床傳染病診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全等領(lǐng)域，已經(jīng)成為一種適用于分子POCT平臺(tái)的理想方法。

分類(lèi)：LAMP檢測(cè)方法分為多種，包括比濁法、pH顯色法、熒光染料法（如NHB、鈣黃綠素、SYBR Green、Syto等）、熒光探針?lè)ǖ取?/span>

2、RPA重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)

原理：重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng)DNA合成，對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中，由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件，主要依賴(lài)于重組酶、Bsu酶和SSB蛋白。可以在37~42 ℃條件下，10~30 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)待測(cè)靶標(biāo)的快速檢測(cè)。

優(yōu)勢(shì)及應(yīng)用：它具有反應(yīng)靈敏度高、特異性強(qiáng)、對(duì)儀器依賴(lài)程度低且可整合多種檢測(cè)模式等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于基層和現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢測(cè)，可廣泛應(yīng)用于體外診斷、動(dòng)物疫病、食品安全、生物安全、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。

分類(lèi)：RPA檢測(cè)方法分為多種，包括電泳法、EXO探針?lè)?、Fpg探針?lè)?、測(cè)流層析試紙條（LF-RPA）以及絮凝分析檢測(cè)等。

部分產(chǎn)品性能展示

01 pH顯色法RT-LAMP試劑

pH顯色法RT-LAMP是將可視染料作為敏感指示劑，在60-65℃等溫條件下，利用恒溫水浴鍋或普通PCR儀完成一步法RNA核酸擴(kuò)增。30min即可通過(guò)反應(yīng)后顏色的變化，判斷是否感染病原體，結(jié)果更直觀（陽(yáng)性為橙黃色，陰性為洋紅色）。該方法適用于大批量人群的快速檢測(cè)。

推薦產(chǎn)品：

RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit（13906ES）

RT-LAMP pH Sensitive Dye Chromogenic Version Freeze-Dryable Kit（13920）（可凍干版）

性能展示：

02 熒光染料法RT-LAMP試劑

熒光染料法RT-LAMP是將熒光染料（如SYBR Green、Syto等）作為熒光標(biāo)記物，在擴(kuò)增反應(yīng)中與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光信號(hào)會(huì)增強(qiáng)800-1000倍。使用熒光定量PCR儀在60-65℃恒溫條件下進(jìn)行測(cè)試，約30min后即可通過(guò)擴(kuò)增結(jié)果判斷是否感染病原體，還可搭配微流控芯片或便攜式檢測(cè)儀快速檢測(cè)。

推薦產(chǎn)品：RT-LAMP Dye Assay Kit（UDGplus）（13762ES）

性能展示：

RT-LAMP/RPA mix選擇指南

LAMP/RT-LAMP原酶選擇指南

RPA原酶選擇指南

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