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鏈霉親和素系列專題
—— 一品多用，實(shí)現(xiàn)大價(jià)值
一 背景介紹
鏈霉親和素是一種來源于阿維丁鏈霉菌（streptomyces avidinii）的生物素結(jié)合蛋白質(zhì)，其非特異性結(jié)合遠(yuǎn)比親和素低，且與蛋清親和素在中性pH值具有凈正電荷和包含大約7%的碳水化合物相比，鏈霉親和素蛋白具有在中性pH值幾乎沒有凈電荷，不含有碳水化合物等更有利的化學(xué)性質(zhì)，所以它被廣泛用來作為抗生物素蛋白的替代品。
二 產(chǎn)品特點(diǎn)
四聚體結(jié)構(gòu)：鏈霉親和素同源四聚體的形式存在，大小為66Kda；
親和力強(qiáng)：每分子鏈霉親和素可以高度特異性地與四分子生物素結(jié)合，兩者之間的親和力極為強(qiáng)烈；
用途廣：鏈霉親和素-生物素復(fù)合物的解離常數(shù)處于 10 mol/L 數(shù)量級(jí)，這一性質(zhì)常用于分子生物學(xué)用途；在大多數(shù)應(yīng)用中，可以與抗生素蛋白抗體相互替代。
提取：由streptomyces avidinii菌提純獲得；
圖1鏈霉親和素
三 產(chǎn)品應(yīng)用
應(yīng)用一 鏈霉親和素純化樹脂
1 應(yīng)用原理
基于鏈霉親和素與生物素之間的相互作用，將鏈霉親和素高度交聯(lián)于6%瓊脂糖上，*的制備工藝使其具有更高的物理化學(xué)特性，可以耐受更高的壓力，在相對(duì)較高的流速下，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的純化，更適于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化。
圖2 鏈霉親和素樹脂的純化原理
2 Yeasen致力于為您提供效率高的產(chǎn)品，為您純化得到更的蛋白。
圖3 鏈霉親和素樹脂純化后的蛋白
3 常見問題
問題 | 可能原因 | 推薦解決方案 |
柱子反壓過高 | 填料被堵塞 | 清洗樹脂。 |
裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上樣前用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，或離心去除。 | ||
樣品太黏稠 | 樣品中含高濃度的核酸，延長破碎時(shí)間直至粘度降低，或添加DNaseI （終濃度為5µg/ml），Mg2+(終濃度1mM)，冰上孵育10-15min | |
緩沖液太黏稠 | 有機(jī)試劑或蛋白穩(wěn)定試劑（如甘油等）可能會(huì)引起反壓增高，降低操作流速。 | |
洗脫組分中無目的蛋白 | 過度的裂解使目的蛋白變性 | 使用溫和的裂解條件，實(shí)驗(yàn)條件以經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。 |
目的蛋白聚集產(chǎn)生沉淀 | 在細(xì)胞裂解前溶液中加入DTT，終濃度為1-10 mM | |
目的蛋白沒有*洗脫下來 | 洗脫體積太少 | 增加洗脫液體積，減小洗脫流速。 |
洗脫液中鹽酸胍的pH 發(fā)生改變 | 使用新鮮配制的洗脫液 | |
洗脫液孵育時(shí)間不夠 | 增加洗脫液與凝膠的孵育時(shí)間 |
應(yīng)用二 熒光基團(tuán)及酶偶聯(lián)物標(biāo)記的鏈霉親和素
圖4 不同標(biāo)記的鏈霉親和素
1 酶偶聯(lián)物標(biāo)記的鏈霉親和素
• 辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈和親霉素
1）由高純度的鏈霉親和素和辣根過氧化物酶，通過特殊的偶聯(lián)技術(shù)生產(chǎn)；
2）保持了過氧化物酶的高比活性。
應(yīng)用于：免疫組化（IHC）、免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）、原位雜交（ISH）等領(lǐng)域。
推薦使用濃度：0.01-0.1 µg/mL for WB（化學(xué)發(fā)光法）；1-2µg/mL for ELISA，HC/ICC，WB(底物顯色
• 堿性磷酸酶標(biāo)記鏈霉親和素
1）適合于固相分析，組織/細(xì)胞染色系統(tǒng)和印跡應(yīng)用，選擇特定的共價(jià)連接；
2）綴合物穩(wěn)定并高活性。
應(yīng)用于：免疫組化（IHC）、免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法（ELISPOT）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、原位雜交（ISH）及印跡應(yīng)用。
推薦使用濃度：1-2 µg/mL for ELISA， IHC/ICC；0.1-1 µg/mL for WB
2 熒光基團(tuán)標(biāo)記的鏈霉親和素
• Fluor®熒光素標(biāo)記鏈霉親和素
1）推薦用于常規(guī)免疫熒光；
2）高度純化并具有非常低的非特異性結(jié)合特性；
3）對(duì)生物素具有較高的親和力；
應(yīng)用于：免疫熒光（IF）、原位雜交（ISH）、流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cyt）。
推薦使用濃度：0.5-2 µg/mL（IF）
• DyLight™ 染料標(biāo)記鏈霉親和素
1）在免疫熒光、原位雜交或流式細(xì)胞術(shù)等應(yīng)用中可用于檢測生物素化的二抗和其他大分子；
2）高度純化并具有非常低的非特異性結(jié)合特性；
3）對(duì)生物素具有*的親和力；
4）高光穩(wěn)定性、pH不敏和更亮的熒光；
應(yīng)用于：免疫熒光（IF）、原位雜交（ISH）、流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cyt）。
推薦使用濃度：0.5-2 µg/mL（IF）
四 產(chǎn)品信息
產(chǎn)品系列 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
鏈霉親和素純化系列 | Streptavidin Agarose Resin 6FF 鏈霉親和素瓊脂糖純化樹脂 | 20512ES08 | 5 mL | 1586.00 |
20512ES25 | 5 mL×5 | 6356.00 | ||
20512ES60 | 100 mL | 16796.00 | ||
BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML 生物素分子純化預(yù)裝柱，1ML | 20513ES03 | 1 mL | 428.00 | |
20513ES08 | 1 mL×5 | 1328.00 | ||
BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5ML 生物素分子純化預(yù)裝柱，5ML | 20514ES08 | 5 mL | 1158.00 | |
20514ES25 | 5 mL×5 | 4958.00 | ||
酶偶聯(lián)物標(biāo)記的鏈霉親和素 | HRP Streptavidin 辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素 | 35105ES60 | 100 µL | 436.00 |
AP Streptavidin 堿性磷酸酶標(biāo)記鏈霉親和素 | 35106ES60 | 100 µL | 436.00 | |
鏈霉親和素 | Streptavidin鏈霉親和素 | 35101ES03 | 1 mg | 326.00 |
35101ES08 | 5 mg | 876.00 | ||
35101ES10 | 10 mg | 1466.00 | ||
35101ES60 | 100 mg | 2856.00 | ||
35101ES80 | 1 g | 9586.00 | ||
熒光基團(tuán)標(biāo)記的鏈霉親和素 | DyLight 405™標(biāo)記鏈霉親和素 DyLight 405™ Streptavidin | 35102ES60 | 100 µL | 436.00 |
Alexa Fluor® 488標(biāo)記鏈霉親和素 Alexa Fluor® 488 Streptavidin | 35103ES60 | 100 µL | 436.00 | |
Alexa Fluor® 647標(biāo)記鏈霉親和素 Alexa Fluor® 647 Streptavidin | 35104ES60 | 100 µL | 436.00 | |
Alexa Fluor® 594標(biāo)記鏈霉親和素 Alexa Fluor® 594 Streptavidin | 35107ES60 | 100 µL | 436.00 | |
Cy3標(biāo)記鏈霉親和素 Cy3-conjugated Streptavidin | 35108ES80 | 1 mg | 1988.00 |
HB190724
