化工儀器網(wǎng)公司動態(tài)
上海哈靈生物專家對ELISA試劑盒的評價
閱讀：1264 發(fā)布時間：2013-7-27上海哈靈生物專家對ELISA試劑盒的評價
ELISA試劑盒是一種十分常用的定性定量檢測方法，人體和動物、體外細(xì)胞培養(yǎng)中80％以上蛋白定量都使用其作為檢測的方法。ELISA試劑盒價格一般非常昂貴，但各家試劑公司的試劑盒質(zhì)量卻魚龍混雜。ELISA試劑盒既有用于科研的，也有用于臨床診斷的。應(yīng)用于臨床診斷的試劑盒必須通過衛(wèi)生部門的許可，國家對用于臨床診斷的試劑盒有相當(dāng)嚴(yán)格的規(guī)定和要求，并制定出了相關(guān)的規(guī)則來管理試劑盒的質(zhì)量。
仔細(xì)閱讀說明書，對說明書的內(nèi)容做一個詳細(xì)的了解。審查內(nèi)容包括：
1. 試劑盒的名稱：ELISA試劑盒名稱一般由“（物種）＋（測定指標(biāo)）＋酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA）”，物種和測定指標(biāo)不能混淆，否則買錯了就是你的事情；另外有的試劑盒說明書試劑盒名稱明顯與寫在試劑盒上的名稱不符，這要引起你的警惕。
2. 用途：應(yīng)用于科研還是臨床診斷，用于臨床診斷的要有衛(wèi)生部的批準(zhǔn)文號。
3. 測定原理：現(xiàn)在ELISA試劑盒除了是測定抗體的以外，一般使用的是雙抗體夾心法，這種方法大多數(shù)用的是增強(qiáng)的雙抗體夾心法，即使用生物素-親和素系統(tǒng)，還有少數(shù)的指標(biāo)可能使用競爭法，這類方法適用于半抗原的測定。具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的多表位蛋白抗原，其雙抗體夾心法中的一個抗體必須用單抗。當(dāng)然如果兩個都是單抗（這兩個單抗針對不同表位），那么測定的線性范圍就較寬，試劑盒性能就較好；一個用單抗，一個用多抗，測定的靈敏度會更高。某些簡單的化合物用ELISA測定時，因?yàn)闆]有兩個或以上的表位，一般只能作為半抗原，只能用競爭法測定。如果發(fā)現(xiàn)有測定簡單化合物（如雌激素、NO、地高辛等）用雙抗體夾心法作測定原理時，這個試劑盒你就要懷疑了。另外還要說明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區(qū)別。一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形，隨著待則標(biāo)本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后，測定吸光度即隨抗原濃度的增加而開始下降直至不顯色，即所謂的“鉤狀效應(yīng)”（hook eHect），也就是我們在免疫沉淀試驗(yàn)中所稱的“帶現(xiàn)象”（zone phenomenon）。所以當(dāng)使用一步雙抗體夾心法時，樣品濃度太高，有時會出現(xiàn)測不出來的現(xiàn)象，此時要作適當(dāng)?shù)南♂尣拍軠?zhǔn)確測定。
4. 試劑盒的組成：用雙抗體夾心法作為測定的方法時，試劑盒的組成一般包括：已包被單抗的酶標(biāo)板：一塊，有96孔的，也有48孔的，可拆缷，外面有鋁箔袋密封，打開后有干燥劑，實(shí)驗(yàn)時暫未使用的酶標(biāo)條要連帶干燥劑密封好，放在4℃冰箱中妥善保存。而應(yīng)用于科研的試劑盒，國家則沒有出臺相關(guān)的質(zhì)量管理規(guī)定，因此試劑盒質(zhì)量也就無法保障。在這種情況下，許多劣質(zhì)的試劑盒在市面泛濫，不少同行為此浪費(fèi)了大量的時間和金錢，卻沒有得到一個良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。下面給戰(zhàn)友們介紹一下如何判斷試劑盒的質(zhì)量，選購好的試劑盒。
ELISA質(zhì)量保證是一個復(fù)雜的過程，許多重要的環(huán)節(jié)都影響到檢測的質(zhì)量：
一、操作因素對ELISA結(jié)果的影響
ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)會產(chǎn)生較大的誤差。
產(chǎn)生較大誤差的影響因素有：
1.加樣
2.溫育
3.洗滌
4.顯色
5.比色
一、操作因素對ELISA結(jié)果的影響
ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)會產(chǎn)生較大的誤差。
產(chǎn)生較大誤差的影響因素有：
1.加樣
2.溫育
3.洗滌
4.顯色
5.比色
二、灰區(qū)的設(shè)置通常情況下，ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽性”和“陰性”來衡量結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”（cut-off value，CO值），這是定性免疫測定結(jié)果報告的依據(jù)。
三、標(biāo)本復(fù)查ELISA手工檢測過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法，比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽性標(biāo)本及少見模式的檢測結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。
四、結(jié)果判斷和報告常用下列幾種方法表示結(jié)果：
1.定性測定
2.半定量測定 結(jié)果一般以滴度表示。
3.定量測定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4.結(jié)果報告
1.定性測定
2.半定量測定 結(jié)果一般以滴度表示。
3.定量測定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4.結(jié)果報告