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“上海滬鼎”文獻：加味當歸芍藥散抑制組蛋白乙?；缸饔脵C制研究
閱讀：659 發(fā)布時間：2019-6-6李燕紅 楊 謙 李錦亮 莊錦填 李振潔 鐘金寶
【摘 要】 目的 探討加味當歸芍藥散抑制組蛋白乙?；福穑常埃埃ǎ穑常埃埃龋粒裕瀛h(huán)加氧酶－２（ＣＯＸ－２）通路調(diào)控核因子 Ｅ２相關(guān)因子２（Ｎｒｆ２）在黃褐斑形成中的作用機制。方法 健康人表皮黑素細胞及３０只雌性小鼠納入研究，采用不同濃度加味當歸芍藥散處理健康人表皮黑素細胞，肌肉注射及紫外線照射建立黃褐斑小鼠模型，將小鼠隨機分為空白組、低劑量組及高劑量組各１０只，分別給予常規(guī)劑量０．９％氯化鈉注射液、低劑量及高劑量加味當歸芍藥散處理，檢測不同濃度處理下細胞活力、細胞黑素含量及細胞中ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２及 Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ 及蛋白表達量，同時檢測治療前后３組小鼠皮膚及肝臟的ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２及 Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ、蛋白質(zhì)表達量。結(jié)果加味當歸芍藥散濃度為１．０ｍｇ／ｍＬ 時健康人表皮黑素細胞活力較對照組明顯低，差異有統(tǒng)計學意義（Ｐ ＜０．０５）；加味當歸芍藥散處理的健康人表皮黑素細胞ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２的 ＲＮＡ 及蛋白表達量和黑素相對含量較對照組明顯低，Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ 及蛋白表達量較對照組明顯高，且隨著加味當歸芍藥散濃度增加，健康人表皮黑素細胞 ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２、Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ 及蛋白表達量降低、升高越明顯，健康人表皮黑素細胞黑素相對含量降低越明顯，差異有統(tǒng)計學意義（Ｐ ＜０．０５）；治療后僅低劑量、高劑量組ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２的 ＲＮＡ、蛋白表達量較治療前明顯降低，Ｎｒｆ２的ＲＮＡ、蛋白表達量明顯升高，且治療后高劑量組各項指標變化較低劑量組明顯，差異有統(tǒng)計學意義（Ｐ ＜０．０５）。結(jié)論 加味當歸芍藥散治療黃褐斑的機制可能與其抑制ｐ３００ＨＡＴ／ＣＯＸ－２通路調(diào)控 Ｎｒｆ２表達有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】 黃褐斑； 環(huán)氧化酶２； 加味當歸芍藥散； ｐ３００ＨＡＴ； Ｎｒｆ２
黃褐斑屬于臨床常見面部皮膚黑色素沉著疾病，易診難治，病因與日曬、內(nèi)分泌失調(diào)、遺傳、情緒 及化妝品等有關(guān)，臨床對其治療尚缺乏單一藥。近年來，運用各種中藥治療黃褐斑并取得了一定的臨床療效［１］?，F(xiàn)階段臨床對黃褐斑發(fā)病機制尚未*明確，一項研究表明環(huán)加氧酶－２（ＣＯＸ－２）催化花生 四烯酸合成的具有生物學活性的前列腺素衍生物可進一步轉(zhuǎn)化成消炎、抗氧化的親電羰基衍生物分子， 并可解離轉(zhuǎn)錄因子核因子 Ｅ２ 相關(guān)因子２（Ｎｒｆ２），激活多種與抗氧化相關(guān)的含抗氧化反應元件（ＡＲＥ）應答元件的基因，ＣＯＸ－２調(diào)控 Ｎｒｆ２可能與其抗炎及抗氧化機制有緊密聯(lián)系［２］，其在黃褐斑形成中可能發(fā)揮一定作用，此 外 ＣＯＸ－２ 的表達與共激活因子ｐ３００ＨＡＴ 的轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)［３］。而近期一項研究指出當歸芍藥散具有顯著的抗氧化、清除自由基等作用［４］，因而本項目在既往研究基礎(chǔ)上開展檢測加味當歸芍藥散作用人表皮黑素細胞生長情況以及組蛋白乙?；福穑常埃埃ǎ穑常埃埃龋粒裕?、ＣＯＸ－２ 及 Ｎｒｆ２ 的表達水平，并建立黃褐斑小鼠模型，對其實行加味當歸芍 藥 散 灌 胃 處 理 ， 并 檢 測 小 鼠 皮 膚 、 肝 臟 的ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２及 Ｎｒｆ２ 的表達水平，通過體外細胞實驗及體內(nèi)動物實驗研究，探討加味當歸芍藥散治療黃褐斑的有關(guān)機制。
１ 材料與方法
１．１ 材料：３０只雌性昆明種小鼠由上海西普爾－必凱實驗動物中心提供，小鼠體質(zhì)量１８～２０ｇ，平均體質(zhì)量（１９．６±０．３）ｇ；健康人表皮黑素細胞株由中南大學湘雅醫(yī)學院腫瘤研究所提供。主要試劑及儀器：①主要試劑：由南京建成生物工程有限公司提供的丙二醛試劑盒（批號：２０１３０５１７）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）試劑盒（批號：２０１４０３１９）、總蛋白定量測試盒（批號：２０１４０３１９），由上海滬鼎生物科技有限公司提供的酪氨 酸 酶 酶聯(lián) 免 疫 吸 附 試 驗（ＥＬＩＳＡ）試劑盒，由上海通用藥業(yè)股份有限公司提供的注射液（批號：１３０４０４），四甲基偶氮唑藍、二甲基亞砜由上海華美生物工程公司提供；②主要儀器：中波紫外線治療儀由 Ｓｉｇｍａ 公司提供，ＤＧ３０２２Ａ 型酶標儀由華東電子管廠提供，由美國Ｍｉｌｉｐｏｒｅ公司提供的 Ｄｉｒｅｃｔ－Ｑ 型超純水儀，德 國ＩＫＡ 公司提供的ＩＫＡ Ｔ１８Ｂ 型組織勻漿機，美國Ｂｅｃｋｍａｎ公司提供的 Ｃｏｕｖｔｅｒ高速冷凍離心機。
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