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破膜劑亦稱通透液,通常可以通過使用有機溶劑例如甲醇、丙酮等,或者使用去垢劑例如Triton X-100、Saponin等來實現對于細胞膜的通透。
甲醇或丙酮等有機溶劑,一方面可以溶解細胞膜和核膜從而充分暴露細胞漿和細胞核中的目的蛋白等,另一方面也可以使細胞內的蛋白變性起到固定的作用。其優(yōu)點是操作比較簡單,一步處理可以同時實現固定和通透,缺點是膜蛋白也會被溶解掉并且有些蛋白變性后不利于后續(xù)的檢測,因此有機溶劑使用相對較少,僅用于一些要求比較粗糙的檢測。Triton X-100是常用的通透試劑,可以通透細胞膜和核膜,作用原理是非特異性地溶解細胞膜,缺點是不利于膜蛋白的檢測,但當使用多聚甲醛進行交聯和固定后,相當一部分膜蛋白會被交聯固定,從而不會被Triton X-100溶解,因此后續(xù)仍然能檢測到。Saponin可以特異性地溶解細胞膜中的,從而實現在細胞膜上選擇性地打孔,其優(yōu)點是適合于細胞膜蛋白的檢測,特別適合通過流式細胞儀檢測細胞膜上的標志性蛋白,缺點是對于一些含量低的細胞通透效果差,通透效果弱于Triton X-100和有機溶劑,并且不能通透含量很低的核膜和線粒體膜。對于凝集素(lectin)的檢測,含Triton X-100等非特異性去垢劑的通透液的優(yōu)于主要含Saponin的通透液。
LeagenePBS-Triton溶液(破膜劑,0.5%)亦稱為免疫染色通透液,主要由PBS磷酸鹽緩沖液 (0.01M,pH7.4)、0.5%Triton X-100組成,可以用于免疫染色等多種原位檢測時細胞樣品、冰凍或石蠟切片的通透處理,有助于暴露抗原、核酸等作用靶點,使抗體、探針或標記物等更容易進入細胞內,從而確保染色等的檢測效果。本產品通透能力強,推薦用于各種常規(guī)的免疫熒光、免疫組化、免疫細胞化學、流式檢測等中細胞的通透。本產品為即用型工作液,可以直接使用,無需稀釋。該試劑僅用于科研領域,不適用于臨床診斷或其他用途。
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