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利用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）進(jìn)行檢測(cè)的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水等，這些樣本收集的時(shí)間、處理方法和保存都會(huì)影響到ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。下面整理了常見細(xì)胞樣本處理方法供大家參考。

 

 

 

 

 

一、如何選擇細(xì)胞樣本收集方式：

細(xì)胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本。

- 目的物是分泌型，主要在胞外，即可選擇細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本，細(xì)胞培養(yǎng)上清處理方法相對(duì)簡(jiǎn)單，取細(xì)胞培養(yǎng)上清，1000 × g離心 20 分鐘，取上清即可檢測(cè)。

- 目的物主要存在于胞內(nèi)，則建議選擇細(xì)胞裂解液作為樣本類型。

需要注意的是： 因該類樣本干擾因素較多，如細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、pH、培養(yǎng)基鹽離子濃度、采樣時(shí)間等，所以可能存在檢測(cè)不到的情況。

二、細(xì)胞裂解液收集方法：

1.貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化，離心收集細(xì)胞（懸浮細(xì)胞可直接離心收集）；

2.將收集到的細(xì)胞用預(yù)冷的 PBS 洗3次；

3.物理方法裂解細(xì)胞（可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融）：

- 超聲破碎：取適量PBS 重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂；

- 反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-20℃以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3次，使細(xì)胞溶脹破碎；

4.將樣本于2-8 度 1500 × g 離心 10 分鐘，收集上清備用。

注: 一般情況下，物理方法如反復(fù)凍融，勻漿等方法會(huì)比化學(xué)方法好，因?yàn)榛瘜W(xué)方法會(huì)引入酸或堿，可能會(huì)對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響。利用化學(xué)的細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，如果去污劑成分會(huì)干擾抗原抗體反應(yīng)影響檢測(cè)效果，推薦利用透析和超濾的方法去除去污劑成分。

三、樣本保存：

1.處理樣本的過(guò)程就是收集目標(biāo)蛋白的過(guò)程，由于蛋白容易變性，降解，故該過(guò)程應(yīng)盡量溫和。

2.樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可按需分裝密封保存， 4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過(guò) 1 個(gè)月，-80度不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月。

3.在檢測(cè)前，凍存樣本應(yīng)緩慢均衡恢復(fù)至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。