液相色譜儀的發(fā)展并不局限
液相色譜儀檢測(cè)器適用于血藥濃度的檢測(cè)器有紫外線吸收，熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。 液相色譜儀紫外檢測(cè)器應(yīng)用于對(duì)紫外光有吸收的藥物，大多數(shù)藥物分子對(duì)紫外光有吸收，故能較普遍采用，檢測(cè)限有0.1μg左右。紫外檢測(cè)器有固定波長(zhǎng)型、可變波長(zhǎng)型及掃描器，既能使流動(dòng)相停流作組分的定性定量檢測(cè)，又能提高測(cè)定靈敏度，重現(xiàn)性較好。熒光發(fā)射檢測(cè)器對(duì)能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。80年代應(yīng)用激光替代氙燈光源，光強(qiáng)度增加了3~4倍，對(duì)某些藥物的檢測(cè)限可達(dá)pg級(jí)。電化學(xué)檢測(cè)器是由一個(gè)碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測(cè)兒茶酚胺類(lèi)及有酚類(lèi)基團(tuán)的各種藥物和代謝物。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池，在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流，放大后檢測(cè)，檢測(cè)限pg級(jí)。
液相色譜儀的化學(xué)鍵合固定相是利用化學(xué)反應(yīng)將有機(jī)分子鍵合到載體表面上，形成均一、牢固的單分子液膜。特點(diǎn)如下：
1、固定相不易流失，柱的穩(wěn)定性和壽命較高。
2、能耐受各種溶劑，可用于梯度洗脫。
3、表面較為均一，沒(méi)有液坑，傳質(zhì)快，柱效高。
4、能鍵合不同基團(tuán)以改變其選擇性。如鍵合氰基和氨基等極性基團(tuán)用于正相色譜，鍵合C2、C4、C6、C8、C18、C22烷基和苯基等非極性基團(tuán)用于反相色譜，鍵合離子交換基團(tuán)用于離子色譜等。
因此，化學(xué)鍵合固定相是液相色譜儀較為理想的固定相。
液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)， 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)， 在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)， 經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過(guò)程， 各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別， 被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出， 通過(guò)檢測(cè)器時(shí)， 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。
液相色譜儀流動(dòng)相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動(dòng)相放于貯液瓶中，經(jīng)過(guò)有濾過(guò)頭、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱，zui后自檢測(cè)器流出或收集或作廢液回收。用流動(dòng)相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法(isocratic dlution)，即自洗脫開(kāi)始到結(jié)束，溶劑的配比恒定。另一類(lèi)為梯度洗脫法(gradicnt clution),即使溶劑的極性強(qiáng)度在色譜過(guò)程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比，從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過(guò)程中很好分離，而整個(gè)液相色譜儀色譜過(guò)程縮短。必須注意，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測(cè)的反相液相色譜法中。
