日本IBL診斷新品：人半乳糖缺乏IgA1(Gd-IgAⅠ)酶聯(lián)試劑介紹：

半乳糖缺乏的IgA1(Gd-IgA1)作為IgA腎疾病發(fā)病機(jī)制和進(jìn)展的關(guān)鍵效應(yīng)分子受到越來越多研究的關(guān)注，在過去，人們采用HAA凝集法進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)研究表明，IgA腎疾病患者血清中的Gd-IgA1的水平顯著高于健康人群或非IgA腎疾病的病人。但是由于多聚糖識(shí)別活性的不穩(wěn)定性，HAA凝集法不適用于大規(guī)模研究中的大量樣本檢測，日本IBL研發(fā)的試劑盒使用能夠特異性識(shí)別Gd-IgA1的鉸鏈序列的單克隆抗體，能夠定量檢測人血清血漿中的Gd-IgA1。同時(shí)由于它的穩(wěn)定，可適用于大規(guī)模的研究中。
Gd-IgAⅠ酶聯(lián)診斷試劑數(shù)據(jù)：

產(chǎn)品預(yù)期用途

本產(chǎn)品僅供科研用，不用于臨床診斷。

此IBL試劑盒能用于人血清和EDTA-血漿Gd-IgA1（半乳糖缺乏型IgA1）的定量檢測。

檢測靈敏度 (0.488 ng/mL)，檢測范圍 (1.56-100ng/mL)。

檢測原理

該人半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgAⅠ）酶聯(lián)試劑是固相夾心ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定法）。將第一抗體包被酶標(biāo)板，加入樣品和標(biāo)準(zhǔn)品帶反應(yīng)孔中，作為第一次反應(yīng)。反應(yīng)后，加入HRP-結(jié)合的二抗進(jìn)入板孔進(jìn)行第二次反應(yīng)。洗去二次抗體后，將四甲基聯(lián)苯胺（TMB）加入到反應(yīng)孔中并顯色。

檢測樣本

人血清和EDTA-血漿。

儲(chǔ)存條件

2-8℃保存，有效期見試劑盒外包裝。

試劑盒成分

1  預(yù)包被板：包被有抗Gd-IgA1（KM55）大鼠IgG              96T x 1

2  酶標(biāo)記抗體：

   (30倍濃縮)HRP標(biāo)記小鼠抗人IgA）                         0.2mL x 1

3  標(biāo)準(zhǔn)品：             人IgA1                             0.3mL x 2      

4  EIA緩沖液：                                             30mL x 1

5  標(biāo)記抗體稀釋液：                                         6mL x 1

6  顯色劑：                                                 15mL x 1

7  終止液：                                                 12mL x 1

8  濃縮洗滌液：                                             50mL x 1

實(shí)驗(yàn)操作步驟

準(zhǔn)備

1. 洗滌液的準(zhǔn)備

試劑盒的洗滌液是一種40倍濃縮液，應(yīng)稀釋為1X洗滌液進(jìn)行洗板用。如用1950 mL稀釋50 mL的濃縮洗滌液，制成2000mL即用稀釋洗滌液。

2. 酶標(biāo)記抗體的準(zhǔn)備

試劑盒中的標(biāo)記抗體是一種30倍濃縮物，根據(jù)所需量用標(biāo)記抗體稀釋液稀釋。稀釋后的標(biāo)記抗體才能用于檢測步驟。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備

加0.3 mL的去離子水到瓶裝標(biāo)準(zhǔn)品中充分溶解，制成200ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品液，該溶液可凍存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋

準(zhǔn)備7支試管，并每支各加120 μL EIA緩沖液。

將200ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品120ul加入到試管-1中混勻，制成100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品，再取100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品120ul到試管-2中混勻，制成50ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品，以此類推，做2倍倍比稀釋，制成100—1.56 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品系列。