德國IBL 肺炎支原體IgM ELISA試劑盒

時間：2011/10/27閱讀：2198

德國IBL肺炎支原體IgM ELISA試劑盒

（貨號：RE56681）

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1、應用范圍

此ELISA試劑盒可用于人血清中抗肺炎支原體IgM抗體的體外定性和定量檢測。

2、前言說明

除病毒、冠狀病毒、流感病毒、副流感病毒或腺病毒外，肺炎支原體也是傳統(tǒng)感冒的致病因子。支原體屬于柔膜體綱。其六個真菌屬的共有特征是沒有細菌細胞避，滲透能力差，體積小。與革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌相比，其基因組明顯更小。它們依靠宿主細胞而生長，個別如寄生蟲一樣依靠宿主有機體而生長。肺炎支原體是一種引起氣管支氣管炎和原發(fā)性非典型肺炎的致病菌。肺炎支原體感染通常可伴隨有續(xù)發(fā)性疾病，如梗塞、腦炎、慢性神經(jīng) 病和格林-巴利綜合征（GBS）。在實驗室內，除冷凝集實驗和補體結合實驗外，ELISA是一種靈敏度較高而且可區(qū)分不同免疫球蛋白的可選方法。在急性感染中，特異性IgA抗體比IgM產(chǎn)生得更有規(guī)律、更快。IgA濃度減少的時間比IgM要早，或是說比后來的IgG增加反應要早。各種各樣的研究都表明，肺炎支原體三種免疫球蛋白的檢測對監(jiān)測其臨床發(fā)展進程是非常有必要的。

3、實驗原理

此固相ELISA試劑盒利用的是夾心法。包被孔內包被了抗原，用對人IgM有特異性的酶標抗體來檢測樣品中的特異性抗體（此抗體可結合到包被抗原上）。底物反應后，所顯示的顏色的強度與檢測到的IgM特異性抗體的量正比。樣品的結果可直接用標準曲線獲得。

4、試劑盒組成：

4×2ml	標準品A-D	1；10；35；125U/mL，待用標準品A=陰性質控標準品B=臨界質控標準品C=弱陽性質控標準品D=陽性質控內含抗支原體的IgM抗體，PBS（磷酸緩沖液），穩(wěn)定劑。
1×14ml	酶標IgM	紅色，待用。內含過氧酶標記的抗人IgM，蛋白緩沖液，穩(wěn)定劑。
1×12×8	包被板	可拆，包被有特異性抗原。
1×14ml	TMB底物液	含TMB
1×14ml	TMB終止液	0.5M的H₂SO₄
1×60ml	稀釋液	含PBS緩沖液，＜0.1%NaN₃
1×60ml	濃縮洗滌液	濃縮型（10×），含PBS緩沖液，吐溫20
2×	粘性金屬板	用于在溫育時遮蓋包被板
1×	塑料袋	用于儲存不用的板條

5、實驗所需材料但試劑盒不提供

1） RF吸附劑

2）移液器，體積：5；50；100；500 µL

3）校準儀

4）樣品稀釋用試管（1ml）

5）帶試劑儲器8道移液器

6）洗滌瓶，自動或半自動洗板機

7）能在450nm處讀數(shù)的酶標儀

8）雙蒸水或去離子水

9）吸水紙，取樣吸頭和計時器

6、實驗前的準備說明

6.1成分準備

稀釋/溶解	成分		稀釋液	比例	備注	貯存	穩(wěn)定性
60ml	洗滌液	加600ml	雙蒸水	1：10	加熱至37°C以溶解結晶，充分混合	2-8°C	8周

6.2樣品稀釋

樣品	稀釋	稀釋液	比例	備注
血清/血漿	全部稀釋	稀釋緩沖液	1：101	例：5µL+500µL

6.3用RF吸附劑處理：

注意	為了避免特異性IgG和類風濕因子的干擾，病人的血清應當用RF吸附劑處理（RE59059）。標準品和質控品千萬不要用RF吸附劑處理。
1.	在400µL按1：101的比例稀釋的樣品中加入20µL RF吸附劑。充分混合。
2.	室溫（18-25℃）下溫育≥1min（＜15min）

為了避免吸附特異性抗體，應當避免溫育時間＞15min。

預處理的樣品可能會是渾濁的。

7、實驗步驟：

1）加100µL標準品和已稀釋樣本于相應反應孔中，在定性檢測中只使用標準品B。

2）封板后室溫（18℃-25℃）溫育60分鐘。

3）移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。

4）在每一微孔中加入100µL酶聯(lián)物。

5）封板后室溫（18℃-25℃）溫育30分鐘。

6）移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時，如果有條件的話，可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。

7）每孔加TMB底物液100µL。

8）室溫（18℃-25℃）避光溫育20分鐘。

9）在每一微孔中加入100µLTMB終止液以終止底物反應。輕輕搖動包被板以使試劑混合均勻。此時，顏色藍色變成黃色。

10）加終止液后60分鐘內在450nm（參考波長：600-650nm）處測OD值。

8、結果計算

在半對數(shù)坐標紙上或用自動生成的方法，以標準品的OD值為Y軸，濃度為X軸，繪制一標準曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對數(shù)圖或對數(shù)-對數(shù)圖都可獲得良好的實驗結果。對于標準曲線圖，用標準品的每一單值進行計算（樣品結果明顯異常的值必須刪除掉，應使用更加合理的單值）。樣品的濃度可直接從標準曲線上獲得。一旦樣品稀釋了，就應當乘以相應的稀釋因子。如果樣品所測得的濃度高于zui高標準，則應根據(jù)實驗前的準備說明所述對樣品進行稀釋，并重新檢測。

9、結果判定：

＞ 12 U/ml 為陽性

8 - 12 U/ml 為可疑

＜ 8 U/ml 為陰性

此檢測結果并不是任何治療結果判定的*因素，它應當結合臨床觀察和診斷結果加以判斷。

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。

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