原位PCR儀的校準(zhǔn)是確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和可靠性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，需結(jié)合儀器特性（如溫度控制、光學(xué)系統(tǒng)等）進(jìn)行系統(tǒng)性校準(zhǔn)。以下是主要校準(zhǔn)要點(diǎn)及方法：

一、溫度校準(zhǔn)

?校準(zhǔn)點(diǎn)設(shè)置?

需覆蓋PCR全溫區(qū)（35-100℃），重點(diǎn)包括變性（94-95℃）、退火（50-65℃）、延伸（72℃）等關(guān)鍵溫度點(diǎn)，并驗(yàn)證邊緣溫度線性度8。

?動(dòng)態(tài)性能測(cè)試?

要求升溫/降溫速率≥1.5℃/s，超調(diào)量≤1℃，穩(wěn)定時(shí)間≤10秒，通過(guò)多點(diǎn)校準(zhǔn)記錄實(shí)際與設(shè)定溫度的偏差。

?均勻性檢測(cè)?

在加熱模塊不同位置（如96孔板對(duì)應(yīng)點(diǎn)）放置傳感器，zui大溫差應(yīng)≤±0.5℃，否則需調(diào)整模塊或更換部件。

二、光學(xué)系統(tǒng)校準(zhǔn)

?ROI校準(zhǔn)?

通過(guò)校準(zhǔn)反應(yīng)板生成目標(biāo)區(qū)數(shù)據(jù)，修正熒光信號(hào)的空間差異，解決特定反應(yīng)孔無(wú)擴(kuò)增信號(hào)的問(wèn)題。

?背景與純熒光校準(zhǔn)?

定期執(zhí)行以消除光學(xué)系統(tǒng)偏差，確保熒光強(qiáng)度檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

三、質(zhì)控與溯源

?自動(dòng)質(zhì)控觸發(fā)?

當(dāng)檢測(cè)項(xiàng)目滿足條件（如質(zhì)控設(shè)置修改、初次運(yùn)行或達(dá)到預(yù)設(shè)周期），系統(tǒng)強(qiáng)制質(zhì)控檢測(cè)，否則無(wú)法進(jìn)行樣本檢測(cè)。

?標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使用?

需選用高精度標(biāo)準(zhǔn)品（如DNA/RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)），校準(zhǔn)不確定度≤允許誤差的1/3。

?計(jì)量規(guī)范遵循?

依據(jù)JJF1527-2015校準(zhǔn)規(guī)范，確保量值可溯源，數(shù)據(jù)跨儀器可比。

四、維護(hù)與記錄

?定期校準(zhǔn)?：建議每6-12個(gè)月或更換關(guān)鍵部件后校準(zhǔn)。

?記錄保存?：校準(zhǔn)證書需包含環(huán)境條件、校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)據(jù)等，原始記錄保存至少5年。

若儀器出現(xiàn)異常（如孔間溫差過(guò)大或熒光信號(hào)異常），需結(jié)合上述方法針對(duì)性排查。